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エレクトロポレーションに用いる直鎖状DNAプラスミドの精製 トピック削除
No.7797-TOPIC - 2019/03/29 (金) 10:49:03 - RX-0
脊索動物の血球細胞にエレクトロポレーションにより、
遺伝子導入したいと考えています。
その際、遺伝子導入に用いるプラスミドを環状と直鎖状の
2種で試したいと考えています。
直鎖状のプラスミドの作製には、制限酵素処理かPCRの
どちらが適しているのでしょうか。
 
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解決 削除/引用
No.7797-4 - 2019/04/02 (火) 09:55:21 - RX-0
asan,おお さんありがとうございます。
ご指摘を参考にPCRでは変異が生じるリスクを考え、制限酵素処理で取り組んでみます。

(無題) 削除/引用
No.7797-3 - 2019/03/30 (土) 15:34:54 - asan

普通は回収量の問題もあるから、制限酵素カットしてゲル精製ですね。

プラスミドならアルカリプレップでug単位でとれますから。


PCRだと、本当にそのバンドが正しいものかは厳密にはわかりませんね。
発現ベクターだと点変異が生じたものが混じってたりするリスクはありますよ。

(無題) 削除/引用
No.7797-2 - 2019/03/29 (金) 12:48:36 - おお
やってみればいいのでは?

PCRだと変異が混じる割合が増えます。

エレクトロポレーションに用いる直鎖状DNAプラスミドの精製 削除/引用
No.7797-1 - 2019/03/29 (金) 10:49:03 - RX-0
脊索動物の血球細胞にエレクトロポレーションにより、
遺伝子導入したいと考えています。
その際、遺伝子導入に用いるプラスミドを環状と直鎖状の
2種で試したいと考えています。
直鎖状のプラスミドの作製には、制限酵素処理かPCRの
どちらが適しているのでしょうか。

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