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糸のようなコンタミについて トピック削除
No.7902-TOPIC - 2019/05/20 (月) 04:46:19 - 酵母でしょうか..
初めて質問させていただきます。
大変貴重な細胞を培養しています。
その細胞を起こしてからというもの、細胞以外のものによるコンタミに悩まされています。

ストックは起こしたバイアルが最後のもので、どうにかレスキューしたいです...。

幸いといいますか、糸というか繊維のような細いものが増え、1日経つとマリモのようなものを形成し浮きます。細胞を100mmディッシュで培養していますが、朝になるとそのマリモが4-8個ほど目に見え、それを先端を切ったp1000チップで吸い上げて、その細胞をそのまま培養しています。

その培養インキュベータは私のみの使用で、100mmディッシュはジップロックの中に入れています。

培地は0.22マイクロンでフィルター済み。
培養フードも紫外線滅菌、アルコール消毒、手袋着用をしっかりしています。
ラボや同じフロアに酵母を使用している人はいません。

完全にそのマリモを取りきると、そのマリモはしばらく生えてきません。

培地には抗生剤としてアンピシリンとストレプトマイシンを加えていますが、コンタミを抑えてはくれません。

この繊維のようなコンタミはなんというコンタミでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.7902-4 - 2019/05/20 (月) 12:23:15 - AA
貴重な細胞だとするとオリジナルの時点でコンタミしているのかもしれませんね。
真菌剤を試してダメそうなら限界希釈でしょうか。

(無題) 削除/引用
No.7902-3 - 2019/05/20 (月) 07:01:39 - 酵母でしょうか..
おおさん、ありがとうございます。
やはりカビでしたか...泣。

この細胞を培養すると必ずこの菌が生えます。
前のラボ(日本)で培養した際にも生えました。

培地が特殊だからかもしれませんが、293、Saos2、ファイブロ、等々では全く起こりません。

一度0.25−2.5マイクログラム/mlで処理してみます。ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.7902-2 - 2019/05/20 (月) 05:56:16 - おお
真菌類のコンタミかと思います。FUNGIZONEなどが抗真菌剤として培養で使われることがあるようですが、ちょっと哺乳類培養細胞に対する毒性もあるので細胞も調子悪くなるかもしれません。最近では他の抗真菌剤も培養のコンタミ防止、除去に使われたりするようですが、あまり詳しくはありません。特にtriazole系の水虫などの治療薬で使われるような薬剤が毒性が少ないという話は聞いたことがあります。

糸のようなコンタミについて 削除/引用
No.7902-1 - 2019/05/20 (月) 04:46:19 - 酵母でしょうか..
初めて質問させていただきます。
大変貴重な細胞を培養しています。
その細胞を起こしてからというもの、細胞以外のものによるコンタミに悩まされています。

ストックは起こしたバイアルが最後のもので、どうにかレスキューしたいです...。

幸いといいますか、糸というか繊維のような細いものが増え、1日経つとマリモのようなものを形成し浮きます。細胞を100mmディッシュで培養していますが、朝になるとそのマリモが4-8個ほど目に見え、それを先端を切ったp1000チップで吸い上げて、その細胞をそのまま培養しています。

その培養インキュベータは私のみの使用で、100mmディッシュはジップロックの中に入れています。

培地は0.22マイクロンでフィルター済み。
培養フードも紫外線滅菌、アルコール消毒、手袋着用をしっかりしています。
ラボや同じフロアに酵母を使用している人はいません。

完全にそのマリモを取りきると、そのマリモはしばらく生えてきません。

培地には抗生剤としてアンピシリンとストレプトマイシンを加えていますが、コンタミを抑えてはくれません。

この繊維のようなコンタミはなんというコンタミでしょうか?

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