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(無題) 削除/引用 No.7966-5 - 2019/06/11 (火) 06:46:51 - 通 こいけさん、 ありがとうございます、参考にさせていただきました。

(無題) 削除/引用 No.7966-4 - 2019/06/10 (月) 23:47:52 - こいけ ちなみにうちではボトルのトリプシンEDTAを解凍後、15ミリチューブに12mLずつ分注して冷凍保存し、1本ずつ解凍して使っています。解凍したものは再び冷凍させないで冷蔵保存し、そのチューブを使い切ってから新しい分注チューブを解凍して使うようにしています。

(無題) 削除/引用 No.7966-3 - 2019/06/09 (日) 13:10:51 - 通 monさんコメントありがとうございます！ monさんからそう言っていただけると信頼性が高いです。 面倒くさいですが、ボスに従おうと思います！

(無題) 削除/引用 No.7966-2 - 2019/06/09 (日) 12:54:21 - mom 培養細胞用のぶた膵臓由来トリプシンは、微量のキモトリプシン様活性が混入しているので4℃保存中に活性が徐々に低下します。 複数人で使用している場合コンタミ被害を拡げない意味もあるでしょう。細胞の調子（異常）もトリプシンの効きである程度は判断出来る細胞もありますし。ボスの指摘はいくつかのリスクを想定しているのでしょう。 でも使っている方は面倒ですよね〜。足りなくなってウオーターバスで溶解させるとコンタミのリスクは高まりますし。 なので、ウチのラボではTrypLE Expressを各人用に分注して使用しています。PBS-EDTAでリンスして数滴垂らしてなじませる方法で使用すると結構使いでありますよ。トリプシン液より高価ですがストックが無くなったら切り替えを提案してみたら。

細胞培養のトリプシンはアリコットを作るべきでしょうか？ 削除/引用 No.7966-1 - 2019/06/09 (日) 02:53:36 - 通 質問させてください。 細胞培養を行う際にGibcoから0.25％トリプシンEDTA（1ボトルあたり100ml）を購入しています。 6ボトルパックを購入し、1つをオーバーナイトで解凍し、4度で保存しています。 約1-2ヶ月くらいで使いきっています。 この方法で5年ほど細胞培養を行ってきましたが、ボスが培養室に立ち入り、トリプシンの保存方法に異議を唱えました。それは、10-15mlずつのアリコットを作って、3-4日以内で使い切るようにとのことでした。 試してみましたが、確かに解凍したばかりのアリコットは解凍するたびによく働いてくれています。 頭で考えたらそうした方がいいのでしょうが、アリコットの手間、15mlチューブ、-20度のスペース、解凍の手間等々を考えると、みなさんはどうされているのかと気になりました。 ボスが言うように自己分解は4度でもされているのでしょうか？ それとも点変異などが入っており、自己分解されないようになっているのか。 確かにこれまでの長期（2ヶ月ほど4度に置いたもの）のものでは効きは悪くなるという印象は確かにあることはあります。いかがでしょうか？

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