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IHCにおける一次抗体の除去 トピック削除
No.7979-TOPIC - 2019/06/14 (金) 01:24:07 - CTLs
お世話になっております。

非常に単純な質問で申し訳ないのですが、
IHCにおいてFFPE tissueの一時抗体を除去するバッファーなどはあるのでしょうか?
二次抗体やdyeの除去バッファーは使っているのでですが、一次抗体用は見つかりません。

かなり昔の話ですが、学会で病理医の方が、その方法について講演していたと思うのですが、さらっと聞いていたため方法を覚えておりません。

もしご存知の方がいらっしゃればご教授いただければ幸いです。

よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.7979-6 - 2019/06/14 (金) 16:45:27 - mom
TSAで標識されたビオチンを剥がすのでは無く(これはおおさんも指摘していますが共有結合なので無理)、HRP標識StAv(あるいはRP標識anti-Biotin抗体)で発色させたDyeを剥がす(脱色する)という意味ですか?
その意味ならHRPの基質は何ですか?(といっても剥がす方法は知らない)

(無題) 削除/引用
No.7979-5 - 2019/06/14 (金) 06:55:21 - CTLs
おおさん

ありがとうございます。
実際には私も聞いたことがありません。

貴重な疾患のスライドを使っているので、dyeさえ剥がせれば再利用できるのになあ、といつも歯痒く思っておりましたので、思い切って質問させていただきました。

(無題) 削除/引用
No.7979-4 - 2019/06/14 (金) 06:48:58 - おお
The tyramide radical then covalently binds to nearby tyrosine residues, providing high-density labeling.

https://biotium.com/technology/cellular-stains/tyramide-signal-amplification/

はがせるか?

(無題) 削除/引用
No.7979-3 - 2019/06/14 (金) 03:48:12 - CTLs
申し訳ありません。

恥ずかしながらいろいろと間違っておりました。

TSAシステムを用いているのですがDyeを除去したいのです。
ご指摘の通り1次および2次抗体はバッファーにより剥がすことができるのですが、Dyeを剥がすバッファーを探しています。

実際に可能かどうかも定かではないのですが、もしご存知でしたらご教授いただければ幸いです。

(無題) 削除/引用
No.7979-2 - 2019/06/14 (金) 03:35:33 - mom
二次抗体が剥がせるなら、同時に一次抗体も剥がれているのでは?
それとも二次抗体のHRP等を失活させているだけ?

IHCにおける一次抗体の除去 削除/引用
No.7979-1 - 2019/06/14 (金) 01:24:07 - CTLs
お世話になっております。

非常に単純な質問で申し訳ないのですが、
IHCにおいてFFPE tissueの一時抗体を除去するバッファーなどはあるのでしょうか?
二次抗体やdyeの除去バッファーは使っているのでですが、一次抗体用は見つかりません。

かなり昔の話ですが、学会で病理医の方が、その方法について講演していたと思うのですが、さらっと聞いていたため方法を覚えておりません。

もしご存知の方がいらっしゃればご教授いただければ幸いです。

よろしくお願いいたします。

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