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MACS後のFACSについて トピック削除
No.7997-TOPIC - 2019/06/18 (火) 19:56:00 - 陰性
お世話になります。

上皮細胞と各炎症細胞の混合物から、上皮細胞をMACSを用いて分離(濃縮)することを考えております。分離には、CD326(EpCAM)のビーズを考えています。

上皮細胞がうまく分離(濃縮)できたか確認のため、MACS前と後で、CD326の蛍光標識でFACSを行って確認しようとしています。

このような操作の際、MACSで用いた抗CD326抗体のビーズと、FACSの抗CD326抗体の蛍光標識は、競合することはないのでしょうか?

もし、上皮細胞のCD326分子にMACSの抗CD326抗体ビーズが飽和しており、FACSのCD326の蛍光色素が結合しにくい状況になっているとすると、FACSの結果の信頼性が低くなってしまうのでは、と懸念しています。

すみませんが、ご存じの方おりましたら、ご教示のほどお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.7997-5 - 2019/06/20 (木) 15:42:22 - TM
MACSとFACSの抗体が、CD326の異なるエピトープを認識する別クローンであれば、問題ないように思います。

蛍光に対するビーズ 削除/引用
No.7997-4 - 2019/06/19 (水) 14:24:46 - ema
個人的な意見かもしれませんが、他の抗体で似たような自分の実験で少し低くなるような印象がありました。
一番きれいに出来たのは蛍光抗体(CD4-PEなど)で染めて、a-PE beadsでMACSして前後を比較でした。

(無題) 削除/引用
No.7997-3 - 2019/06/19 (水) 11:00:32 - 陰性
ありがとうございます。
早速試してみようと思います。

(無題) 削除/引用
No.7997-2 - 2019/06/19 (水) 04:03:56 - 遠さく推し
抗原抗体反応はついたり離れたりを繰り返しています。
なので、問題ないと思います。

MACS後のFACSについて 削除/引用
No.7997-1 - 2019/06/18 (火) 19:56:00 - 陰性
お世話になります。

上皮細胞と各炎症細胞の混合物から、上皮細胞をMACSを用いて分離(濃縮)することを考えております。分離には、CD326(EpCAM)のビーズを考えています。

上皮細胞がうまく分離(濃縮)できたか確認のため、MACS前と後で、CD326の蛍光標識でFACSを行って確認しようとしています。

このような操作の際、MACSで用いた抗CD326抗体のビーズと、FACSの抗CD326抗体の蛍光標識は、競合することはないのでしょうか?

もし、上皮細胞のCD326分子にMACSの抗CD326抗体ビーズが飽和しており、FACSのCD326の蛍光色素が結合しにくい状況になっているとすると、FACSの結果の信頼性が低くなってしまうのでは、と懸念しています。

すみませんが、ご存じの方おりましたら、ご教示のほどお願いいたします。

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