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(無題) 削除/引用 No.800-3 - 2012/07/31 (火) 18:59:42 - BAC+Dam mon様 　ありがとうございます。 　ただ、GFPを置き換えただけのコンストラクトではマウスがうまくできているので、重要なcis-elementがこの領域にあるとは思えないのですが。 　確かに否定はできないのですが。

(無題) 削除/引用 No.800-2 - 2012/07/31 (火) 14:29:02 - mon 深く考えないと、欠失させたexon1-exon2の間のintronに発現に重要な配列（エンハンサー様？）がある、とか。

BACトランスジェニックマウスがうまくできない 削除/引用 No.800-1 - 2012/07/31 (火) 13:43:42 - BAC Dam 　掲題の件で悩んでおります。 　 　以前作製たBACトランスジェニックマウスBACのトランスジーンをバクボーンに、以前とは異なるcDNAを挿入し、マウスを作製しようと試みております。（ちなみに、以前作製したマウスは予想通りの発現パターンを示しておりました） 　 　これまでに２０匹近くファウンダーマウスが得られておりますが、どれもtransgeneに挿れた遺伝子を発現していませんでした。 　transgeneのシークエンス配列は問題ないことがわかっており、このトランスジーンをin vitroのエレクトロポレーションで細胞に導入すると、ちゃんと発現が認められます。 　私はこれまで３ラインのトランスジェニックマウスを作製してきましたが、こんなに発現しないファウンダーが得られたのは初めてです。今までがたまたま運が良かっただけなのか（こういったケースはまれではなく、このtransgeneを使ってmicro-injectionをし続ければいつかは得られるのものなのか）、それとも何かtransgeneに思いもよらない欠陥があって発現しないのか、アドバイスを頂けたらと願っております。 　ちなみに、今回発現させようと考えている遺伝子は、BAC上のexon1-exon2を相同組み換えで[遺伝子X-IRES2-GFP-kanamycin resistance gene]に置き換えております。以前は[遺伝子X-IRES2-GFP]の部分を[GFP]単独で置き換えたときのtransgeneで作ったマウスはうまく発現してくれました。（個人的にはIRES2があるとダメなんじゃないかという『気』がします。） 　何卒、ご教授よろしくお願いいたします。

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