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免疫染色の抗体の再利用 トピック削除
No.8016-TOPIC - 2019/06/23 (日) 09:00:15 - IF
細胞の蛍光免疫染色を行っています。1次抗体を節約したく、一度染色に使用した抗体を回収し、再利用できないかと考えています。
希釈(500倍希釈とか)した状態では4度保存でも回数や時間を経る毎に染まりが悪くなるであろうことは想像できるのですが、皆様どれぐらい抗体を再利用されておられますでしょうか?(どれぐらい再利用可能でしょうか?)

抗体や使用状況によって変わるとは思いますが、再利用回数や保存期間など、感覚的なところでも結構ですので、イメージをお聞かせいただければうれしいです。
よろしくお願いいたします。
 
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No.8016-7 - 2019/06/24 (月) 12:09:05 - IF
APさん

ありがとうございます。結構再利用できるのですね。
是非試していこうと思います。

(無題) 削除/引用
No.8016-5 - 2019/06/24 (月) 08:49:56 - 遠さく推し
節約乙さんのはウエスタンの抗体の再利用についてですよね?
トピ主さんは細胞免疫染色でのお伺いのようです。

APさん、大変参考になりました。(横からですけど)

(無題) 削除/引用
No.8016-4 - 2019/06/23 (日) 17:45:17 - AP
少なくとも5、6回は可能。
防腐剤としてアジ化ナトリウムを加えて冷蔵保存。
標的に対して抗体は過剰量なので濃度の低下はそれほど感じない。
だって、ネガコンのため標的抗原で前吸収をかけるという手法があるけど、なかなか吸収しきれずにシグナルが消えないくらいですもの。

むしろ、ポリクロ、抗血清の場合は、非特異的反応をする抗体種が前吸収されて、あとの方ほどS/Nが良く綺麗に染まったりする。

(無題) 削除/引用
No.8016-3 - 2019/06/23 (日) 10:43:09 - 節約乙
自分ではしたことないけど、していた人いて1度借りた事ある。。Skim milk + azide in TBS-Tで1000倍くらいで。20回くらい再利用で使ってるとかいってた。よそから少しだけ分けてもらった抗体で、当時は市販されていないものらしく、すごい貴重とかいってた。一応、普通にシグナルでた。

(無題) 削除/引用
No.8016-2 - 2019/06/23 (日) 09:11:11 - 遠さく推し
実は私も気になっていました。

ウエスタンでは抗体は回収して再利用しています。
アジ化ナトリウムを入れて。

ただ免疫染色の場合、抗体濃度も高くなりますので、節約できればなぁ...と考えていましたが、朝鮮してみたことはありません。みなさんからコメントいただけるといいですね。

免疫染色の抗体の再利用 削除/引用
No.8016-1 - 2019/06/23 (日) 09:00:15 - IF
細胞の蛍光免疫染色を行っています。1次抗体を節約したく、一度染色に使用した抗体を回収し、再利用できないかと考えています。
希釈(500倍希釈とか)した状態では4度保存でも回数や時間を経る毎に染まりが悪くなるであろうことは想像できるのですが、皆様どれぐらい抗体を再利用されておられますでしょうか?(どれぐらい再利用可能でしょうか?)

抗体や使用状況によって変わるとは思いますが、再利用回数や保存期間など、感覚的なところでも結構ですので、イメージをお聞かせいただければうれしいです。
よろしくお願いいたします。

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