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ELISAによる定量について トピック削除
No.8027-TOPIC - 2019/06/25 (火) 21:06:21 - elisa
いつも勉強させていただいています。
ELISAによる定量の考え方についてアドバイスください。

溶液中のあるタンパク質についてELISAでの定量を検討しています。
ELISAはサンドイッチ法を用いています。
スタンダードを3倍希釈x10段階でおいて、4パラメーターロジスティック回帰の逆関数を用いてシグナルから濃度を算出しています。

このとき、
1,定量下限(LOQ)とは、どのように求めればよいのでしょうか?
2.サンプルを3段階に希釈し測定しており、倍率ごとに定量値にバラつきがある場合、どの値を採用すればよいのでしょうか?

1.について、文献を見るとLOQが明記されている場合が多いのですが、求め方までは言及がなく困っています。
2.については、検量線のレンジがあまり広くなく、サンプル毎に濃度の差が大きい場合があるので、希釈倍率を振っています。シグナルが上限、下限に近い場合は除外していますが、微妙な数値の場合、選び方によって有意差有り無しにモロに影響するケースが度々あり、恣意的にならないよう何を基準にすべきかと思いまして、、、

稚拙な質問かと思いますが定量的な解析には不慣れなもので、アドバイスいただけないでしょうか。
よろしくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.8027-4 - 2019/06/26 (水) 23:20:27 - あの
1は まず濃度ゼロのサンプルを、6ウェル以上で測る。


サンドイッチなら
6個のODの平均に、6個の標準偏差の2倍足して算出した
ODをスタンダードカーブに当てはめて、得られる濃度。

濃度ゼロの母集団では無いと考えられるのが、平均プラス2標準偏差だから。

(無題) 削除/引用
No.8027-3 - 2019/06/26 (水) 12:35:14 - つん
1について
ELISA、定量限界、とかで検索すれば算出方法がすぐに見つかりますが、調べましたか?


2について
おお様に同意。

(無題) 削除/引用
No.8027-2 - 2019/06/25 (火) 23:55:28 - おお
>スタンダードを3倍希釈x10段階でおいて、4パラメーターロジスティック回帰の逆関数

低濃度や高濃度でグラフが寝てくるのでこのような方法を使っているような気がしますが、直線に乗らないところはブレが出てくるので、直線でrかrの自乗で一定以上の数値が出る範囲のスタンダードで直線を引いて、そこに乗るデーターの数値を使うことにしたらいいとおもいます。

ELISAによる定量について 削除/引用
No.8027-1 - 2019/06/25 (火) 21:06:21 - elisa
いつも勉強させていただいています。
ELISAによる定量の考え方についてアドバイスください。

溶液中のあるタンパク質についてELISAでの定量を検討しています。
ELISAはサンドイッチ法を用いています。
スタンダードを3倍希釈x10段階でおいて、4パラメーターロジスティック回帰の逆関数を用いてシグナルから濃度を算出しています。

このとき、
1,定量下限(LOQ)とは、どのように求めればよいのでしょうか?
2.サンプルを3段階に希釈し測定しており、倍率ごとに定量値にバラつきがある場合、どの値を採用すればよいのでしょうか?

1.について、文献を見るとLOQが明記されている場合が多いのですが、求め方までは言及がなく困っています。
2.については、検量線のレンジがあまり広くなく、サンプル毎に濃度の差が大きい場合があるので、希釈倍率を振っています。シグナルが上限、下限に近い場合は除外していますが、微妙な数値の場合、選び方によって有意差有り無しにモロに影響するケースが度々あり、恣意的にならないよう何を基準にすべきかと思いまして、、、

稚拙な質問かと思いますが定量的な解析には不慣れなもので、アドバイスいただけないでしょうか。
よろしくお願い致します。

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