Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

脾臓のフローサイトでの赤血球溶血操作時の疑問について トピック削除
No.8069-TOPIC - 2019/07/10 (水) 11:28:38 - 脾臓
脾臓のフローサイトでの赤血球溶血操作時の疑問について質問させてください。

マウス脾臓を取り出し、先を90度に折った21Gの針で脾臓細胞を脾臓から丁寧に取り出しています。この時のバッファーはPBSにBSAとEDTAを加えたものです。

だいたいほぐれたら70ミクロンのフィルターで細胞を濾し被膜や結合組織、脂肪組織を除いた後、200Gで遠心し、デカント後に1mlのACKバッファーという赤血球溶血バッファーを加え、すぐに遠心し、上清をデカントし、そこにFACSバッファーを加えて染色をはじめています。

ここで質問があるのですが、FACSバッファーで最後に懸濁した際にも被膜のような不溶性の浮遊物が生じます。この浮遊物はACKバッファー処理することで発生しているようです。これはなんでしょうか?

ACKバッファー処理で赤血球が壊れ、その赤血球膜なんかが凝縮しているのでしょうか?これはみなさんでも生じていますでしょうか?

教えてください、よろしくお願いします。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



2件 ( 1 〜 2 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.8069-2 - 2019/07/10 (水) 13:27:38 - bluehornet
私も末梢血から有核細胞成分を分離する際にACKバッファーを使っています。
溶血・遠心後に有核細胞成分ペレットの上に半透明で赤色がかった層を認めますが、これがいわゆる赤血球ゴースト(のハズ)です。
私の場合この成分は必要ないので、ピペッティングで赤色半透明の層をなるべく除くようにしています。

脾臓のフローサイトでの赤血球溶血操作時の疑問について 削除/引用
No.8069-1 - 2019/07/10 (水) 11:28:38 - 脾臓
脾臓のフローサイトでの赤血球溶血操作時の疑問について質問させてください。

マウス脾臓を取り出し、先を90度に折った21Gの針で脾臓細胞を脾臓から丁寧に取り出しています。この時のバッファーはPBSにBSAとEDTAを加えたものです。

だいたいほぐれたら70ミクロンのフィルターで細胞を濾し被膜や結合組織、脂肪組織を除いた後、200Gで遠心し、デカント後に1mlのACKバッファーという赤血球溶血バッファーを加え、すぐに遠心し、上清をデカントし、そこにFACSバッファーを加えて染色をはじめています。

ここで質問があるのですが、FACSバッファーで最後に懸濁した際にも被膜のような不溶性の浮遊物が生じます。この浮遊物はACKバッファー処理することで発生しているようです。これはなんでしょうか?

ACKバッファー処理で赤血球が壊れ、その赤血球膜なんかが凝縮しているのでしょうか?これはみなさんでも生じていますでしょうか?

教えてください、よろしくお願いします。

2件 ( 1 〜 2 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。