Bio Technical フォーラム

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3xFLAGにさらにFLAGがつながった場合 トピック削除
No.8102-TOPIC - 2019/07/24 (水) 05:30:22 - FL
既存のFLAGタグを、結合力アップのために3xFLAGにしようと思うのですが、クローニング(制限酵素サイト)の都合で、3xFLAG-Ile-Leu-FLAGと、元々のFLAGを残したまま、2アミノ酸をはさみ上流に3xFLAGを挿入するのが最も簡単な状況となっています。

いわば4xFLAGとなることに、別に大きな問題はないとは思うのですが、タグ配列が過剰に存在すると逆に良くないといった知見はありますでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.8102-4 - 2019/07/24 (水) 11:29:54 - おお
どう影響があるかわかりませんが、Dが多くなりその部分の電荷がネガティブに強くなる。ちょっと気になる点だとおもう。まあ3つつけた時点で結構なもんですけど。

構造的にはどうなんだろう。

(無題) 削除/引用
No.8102-3 - 2019/07/24 (水) 10:48:10 - あかね
superFLAGありますよ。
https://www.cell.com/molecular-cell/pdfExtended/S1097-2765(19)30130-3

(無題) 削除/引用
No.8102-2 - 2019/07/24 (水) 07:59:52 - FL
ちょっと調べたら、3xFLAG+FLAGではありませんが、単純にFLAGを4つ並べた4xFLAGが挿入されたベクターがみつかったので、問題はないみたいですね。

https://www.addgene.org/92090/

お騒がせしましたが、もし使用感をご存知の方がいらっしゃいましたら、事前知識としてご教示いただけると幸いに思います。

3xFLAGにさらにFLAGがつながった場合 削除/引用
No.8102-1 - 2019/07/24 (水) 05:30:22 - FL
既存のFLAGタグを、結合力アップのために3xFLAGにしようと思うのですが、クローニング(制限酵素サイト)の都合で、3xFLAG-Ile-Leu-FLAGと、元々のFLAGを残したまま、2アミノ酸をはさみ上流に3xFLAGを挿入するのが最も簡単な状況となっています。

いわば4xFLAGとなることに、別に大きな問題はないとは思うのですが、タグ配列が過剰に存在すると逆に良くないといった知見はありますでしょうか?

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