Bio Technical フォーラム

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融解曲線分析 ピーク トピック削除
No.8225-TOPIC - 2019/09/05 (木) 17:26:10 - 学生
基本的な質問で失礼します。

サイバーグリーンでの融解曲線分析を行ったのですが、
スタンダードおよびサンプルはどちらも増幅されていました。、
ただ、スタンダードのピークとサンプルのピークの位置が1.5℃ほどずれていました。
ピークの大きさはスタンダードとほとんど同じくらいです

これはサンプルは陰性の判定となり、プライマー由来の非特異的増幅等が原因なのでしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.8225-3 - 2019/09/05 (木) 23:01:54 - おお
あ、あとマシーンによって測定誤差も違ってくる可能性があるので、スペックのチェックやメーカー問い合わせなどしてみるのも手かもしれません。

(無題) 削除/引用
No.8225-2 - 2019/09/05 (木) 22:56:55 - おお
http://www.takara.co.kr/file/manual/pdf/MR201_DS.v1101.pdf
3. 融解曲線分析より得られた Tm 値が、陽性コントロールDNA(10 倍希釈液)の Tm 値±1.5°Cの幅に含まれる


http://www.naro.affrc.go.jp/laboratory/niah/disease/paratuberculosis/answer/index.html#q3
各糞便検体の解離温度の許容範囲はその平均値の±1.5°Cです。


それぐらいの誤差が出る可能性があるようですが、念のためある程度分解能がある電気泳動(PAGEとか)で確認してみると言いかと思います。




融解曲線の変化は蛍光強度などを微分しているのでピークの高さとかどれだけ意味があるのだろうか。

融解曲線分析 ピーク 削除/引用
No.8225-1 - 2019/09/05 (木) 17:26:10 - 学生
基本的な質問で失礼します。

サイバーグリーンでの融解曲線分析を行ったのですが、
スタンダードおよびサンプルはどちらも増幅されていました。、
ただ、スタンダードのピークとサンプルのピークの位置が1.5℃ほどずれていました。
ピークの大きさはスタンダードとほとんど同じくらいです

これはサンプルは陰性の判定となり、プライマー由来の非特異的増幅等が原因なのでしょうか。

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