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(無題) 削除/引用 No.8260-4 - 2019/09/20 (金) 22:05:55 - おお ああさん、 貴重なご意見ありがとうございます。 浅識でまだまだ知らないことばかりなので教えていただきたいのですが、 仮にGDNF刺激の際、普段スタベーションに用いる1%FBS DMEM培地にGDNFを溶かして培養細胞に暴露するというのは問題ないでしょうか。 そして、コントロールとしても同じ1% FBSを用いようと思います。 ご意見の程、よろしくお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.8260-2 - 2019/09/20 (金) 19:04:32 - ああ ERKのリン酸化はFBSによってかなり誘導されます。 スタベーションをかけるとか、１０%FBSで８割コンフルにした後FBS濃度を下げるなどした方がいいと思います。

GDNFとErkの関係性及びリン酸化実験の心得 削除/引用 No.8260-1 - 2019/09/20 (金) 17:01:50 - おつかれ 現在、GDNFとErkの関連性を検討しています。 フルコンフルエンス培養状態の細胞に、PBS洗浄後、 GDNF刺激100ng/ml（in 2ml DMED(10%FBS,1％P/S)）で行い、 5,10,15,20,30minで回収を行っています。 WBによりErkのリン酸化を確認したところ、15分の段階で著名にリン酸化が上昇し、その後緩やかに基底状態へ向かう動きをしました。 しかしコントロールとして、GDNFを含まないDMEMのみの培地を、同じく添加したところ、ほぼ同じリン酸化の動きをしました。 そこで質問なのですが、 �@Erk経路は通常のDMEM培地の成分によって動くのか。 �A刺激によるリン酸化の確認実験を行う上で、頭に入れておく事、禁忌事項、等、 過去に刺激によるErkリン酸化実験を検討した事の有る方や有識者の方、ご教授お願い致します。 また、GDNFとErkの関連性を検討した後、その経路のある遺伝子をsiRNAで下げた後、三つの関連性を検討する予定です。

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