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Primersの保管方法 トピック削除
No.8406-TOPIC - 2019/11/14 (木) 11:31:16 - Primers
いつも拝見しております。

私はIDTから頻繁にqPCRやクローニング用のプライマーを購入しています。
100uMの濃度でTEにすでに溶解してあります。

これを10uMに希釈したものを実際に用いています。
ただプライマーの数がものすごく多くなるので上司に倣い、オリジナルのストック溶液の方を常温で保存しています。

今日、2014年に発注したプライマー(常温保存)をTEで10倍希釈し、使ってPCRを行いましたが、バンドが出ませんでした。
他の遺伝子に関しては2014年のものでもバンドは出ます。

もちろん今回のサンプルでその遺伝子が発現していなかった可能性はありますが、プライマーを常温保存というのはやはりまずいでしょうか?常温保存の理由は-20度や-80度の冷凍庫にプライマー保存用のボックスがないためです。

一度プライマーを注文し直す予定ではありますが、プライマーの常温保存はあり得ない、だとか、-20度に保存していても5年も前のものは劣化するだろう、だとか、プライマーは常温で保存しているしバンドが出ないのはPCRの問題でしょう、だとかコメントをお寄せいただけると幸いです。

もちろん冷凍保存した方がいいに決まっていますが、ただスペースの問題でそれができないでいます(5年も)。
 
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No.8406-5 - 2019/11/17 (日) 00:37:46 - marchan亭
当方、プライマーは基本−30℃で保管しています。ただし、頻繁に使用するものは4℃で冷蔵保管しています(融解の手間を省くため)。
厳密に記録はしていませんが半年〜1年は使えており、更に長期間保管できると思います。TEに溶けていれば、DNAは結構長持ちする印象です。冷蔵スペースがあればそちらで保管するだけでも変わると思います(が、もしかして冷蔵スペースもないのかもしれませんね・・・)

(無題) 削除/引用
No.8406-4 - 2019/11/14 (木) 14:12:59 - bluehornet
PCRをするときはとにかくポジコン、ネガコンを置いたほうがいいですよ。

(無題) 削除/引用
No.8406-3 - 2019/11/14 (木) 11:54:45 - ちき
https://sfvideo.blob.core.windows.net/sitefinity/docs/default-source/technical-report/stability-of-oligos.pdf?sfvrsn=c6483407_10

(無題) 削除/引用
No.8406-2 - 2019/11/14 (木) 11:50:31 - TS
常温での長期保存はさすがに難しいと思います。
化学的なデグラデーションが起きるかどうかはわかりませんが、
少しでもバクテリアのコンタミがあればすぐにダメになるでしょう。
どのくらい使えるかは状況次第としかいいにくいです。

スペースがないとおっしゃっているので本当に全くないのかもしれませんが、
繰り返し使う見込みのあるプライマー(qPCR用とか)くらいはスペース探せませんかね。
家庭用の冷凍庫でも大丈夫ですし、やはり冷凍保存かなと思います。
わたしは-20度保存ですが使えなくなったことは基本的にないです。

Primersの保管方法 削除/引用
No.8406-1 - 2019/11/14 (木) 11:31:16 - Primers
いつも拝見しております。

私はIDTから頻繁にqPCRやクローニング用のプライマーを購入しています。
100uMの濃度でTEにすでに溶解してあります。

これを10uMに希釈したものを実際に用いています。
ただプライマーの数がものすごく多くなるので上司に倣い、オリジナルのストック溶液の方を常温で保存しています。

今日、2014年に発注したプライマー(常温保存)をTEで10倍希釈し、使ってPCRを行いましたが、バンドが出ませんでした。
他の遺伝子に関しては2014年のものでもバンドは出ます。

もちろん今回のサンプルでその遺伝子が発現していなかった可能性はありますが、プライマーを常温保存というのはやはりまずいでしょうか?常温保存の理由は-20度や-80度の冷凍庫にプライマー保存用のボックスがないためです。

一度プライマーを注文し直す予定ではありますが、プライマーの常温保存はあり得ない、だとか、-20度に保存していても5年も前のものは劣化するだろう、だとか、プライマーは常温で保存しているしバンドが出ないのはPCRの問題でしょう、だとかコメントをお寄せいただけると幸いです。

もちろん冷凍保存した方がいいに決まっていますが、ただスペースの問題でそれができないでいます(5年も)。

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