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大腸菌の内膜を染める染色剤はありますか? トピック削除
No.8432-TOPIC - 2019/11/21 (木) 19:25:38 - くり
現在、大腸菌の内膜の染色を試みているのですが上手くいかず困っています…

最終的にはFRAPを行い細胞膜の流動性を測定するのが目的なのですが、そもそも内膜の染色が出来ません。

FM4-64やDilC18とよばれる染色剤は試してみたのですが染色できず...
おそらく、染色剤が外膜を透過出来ていないのだと予想しています。

もし、大腸菌や他のグラム陰性細菌などで内膜を染色した経験がある方がいらっしゃいましたら、その方法についてぜひご教授いただきたいです。

よろしくお願い致します。
 
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No.8432-6 - 2019/11/23 (土) 13:04:12 - くり
おおさん

それは願ってもない情報です!
是非詳細が知りたいです。
もしよろしければ文献のタイトルなど教えて頂いてもよろしいですか?

(無題) 削除/引用
No.8432-5 - 2019/11/23 (土) 04:07:32 - おお
ちょっと染めている文献見ましたけど普通に色素加えて培養しているような感じでしたねぇ。。。
もうちょっと調べれたら良かったんですけど。

(無題) 削除/引用
No.8432-4 - 2019/11/22 (金) 22:45:44 - くり
mozさん、T-2さん、ご回答頂きありがとうございます。

出来るだけ無傷のままで染色出来ればと思っていましたが、そんな都合の良い染色剤は存在しないかも知れませんね…

グリシンで外膜が不安定になる事や排出ポンプの阻害について全く頭に無かったので目からうろこが落ちました。
貴重なご意見ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.8432-3 - 2019/11/22 (金) 12:58:51 - T-2
大腸菌の膜染色は行ったことはありませんが、
染色されないのは膜透過性の問題と
efflux pumpによる排出が考えられます。
前者は膜障害剤のPMBNを用い、
後者はPAβNなどの阻害剤を用いれば
染色できるかもしれません。

参考までに。

(無題) 削除/引用
No.8432-2 - 2019/11/22 (金) 09:39:43 - moz
菌体の膜染色の経験はありませんので、参考になれば幸いです。
グラム陰性細菌は培地にグリシンを0.2~1%添加すると外膜合成酵素が(部分的に)阻害されてスカスカになり各種物質が浸透しやすくなります。
アンピシリンを添加する方法もあるようです。
どちらも濃度や処理時間は最適化が必要だと思います。
また細菌が破裂しないように培地の浸透圧を調整した方がよいかもしれません。
染色してから上記阻害剤を抜くと直ぐに正常な外膜が形成されるか否か不明ですのでご注意ください。しばらく培養(分裂)すれば元に戻るようです。

大腸菌の内膜を染める染色剤はありますか? 削除/引用
No.8432-1 - 2019/11/21 (木) 19:25:38 - くり
現在、大腸菌の内膜の染色を試みているのですが上手くいかず困っています…

最終的にはFRAPを行い細胞膜の流動性を測定するのが目的なのですが、そもそも内膜の染色が出来ません。

FM4-64やDilC18とよばれる染色剤は試してみたのですが染色できず...
おそらく、染色剤が外膜を透過出来ていないのだと予想しています。

もし、大腸菌や他のグラム陰性細菌などで内膜を染色した経験がある方がいらっしゃいましたら、その方法についてぜひご教授いただきたいです。

よろしくお願い致します。

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