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安価な細胞死アッセイ トピック削除
No.8469-TOPIC - 2019/12/04 (水) 09:25:11 - セル
いつも参考にさせていただいております。

他研究室から依頼されて学生の面倒を見ることになったのですが、
アポトーシス等の細胞死を見ることになりそうです。
細胞死関連は経験がないのですが、安価で細胞死を見るのに
良いキット等ご存知の方は教えていただけませんでしょうか。
あまりお金がかからない方法を選択したいので……。
簡単な卒業論文のようなので、あまり方法にこだわりはありません。

よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.8469-8 - 2019/12/05 (木) 04:11:59 - おお
>一番ローテク+簡単なのなら、トリパンブルーとかで血球計算版でカウントする

接着細胞なら剥がさずにかけて染まったものをポジとすることもありますね。

(無題) 削除/引用
No.8469-7 - 2019/12/04 (水) 22:58:56 - クァwせdrftgyふじこlp;
タネル染色のkit売ってる。普通に説明書に沿ってやれば、苦労せずに一応それなりにいいかじのデータ得られる。他のマーカーもkitある。

(無題) 削除/引用
No.8469-6 - 2019/12/04 (水) 20:29:44 - A
ただでできる究極なのは核の観察。染色なしで普通の顕微鏡でも断片化しているのは見える。

ありがとうございました 解決済み 削除/引用
No.8469-5 - 2019/12/04 (水) 12:28:46 - セル
みなさん、有意義なアドバイスをありがとうございました。
トリパンブルー、MTT、DNAラダーで対応しようと思います。
アポトーシスは詳しくなかったため、大変助かりました。

(無題) 削除/引用
No.8469-4 - 2019/12/04 (水) 10:09:10 - mon
トリパンブルーとDNA laddarでいいだろ

(無題) 削除/引用
No.8469-3 - 2019/12/04 (水) 10:01:55 - asan

一番ローテク+簡単なのなら、トリパンブルーとかで血球計算版でカウントするのは昔から行われてると思います。ただ、アポトーシスとかその辺の定義からするとゆるいし、自分で数えるのでスループットが悪いため、それを考えるなら、MTT試薬とかを使って吸光度で増殖(厳密には細胞死とは言えない)をみるか、プロメガあたりの蛍光試薬をもちいることになるかと。より、厳密なアポトーシスを評価したいなら、FACSが使えるならAnnexin-V,PIとかで展開するとか、activeCas3とかその切断を見るあたりのリードアウトはよく使われるでしょう。

やる気ない卒論学生程度なら、トリパンブルーでざっくり評価した上で、DNA laddarとか死んでる細胞の死に方を顕微鏡かでしっかり評価してアポトーシスが起きてますってやるのが楽で金がかからんアプローチだと思いますけどね。あとは、zVADとかでアポトーシスが抑制されるかとかファンクショナルな実験組めば。

(無題) 削除/引用
No.8469-2 - 2019/12/04 (水) 09:56:09 - おお
トレパンブルー、PIなどの取り込みで見れないこともないですけどね。

安価な細胞死アッセイ 削除/引用
No.8469-1 - 2019/12/04 (水) 09:25:11 - セル
いつも参考にさせていただいております。

他研究室から依頼されて学生の面倒を見ることになったのですが、
アポトーシス等の細胞死を見ることになりそうです。
細胞死関連は経験がないのですが、安価で細胞死を見るのに
良いキット等ご存知の方は教えていただけませんでしょうか。
あまりお金がかからない方法を選択したいので……。
簡単な卒業論文のようなので、あまり方法にこだわりはありません。

よろしくお願いいたします。

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