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iPCRで、リン酸化後に精製せずにリガーゼ反応 トピック削除
No.8481-TOPIC - 2019/12/10 (火) 11:06:59 - iPCR
iPCRで、リン酸化後にスピンカラムで精製せずにリガーゼ反応してもいいでしょうか?
バッファーは同じリガーゼバッファーですし...

いかがですか?つまりキナーゼを除くべきかと言うことになるかと思いますが...
すみません、めっちゃ初歩的な質問...
 
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(無題) 削除/引用
No.8481-4 - 2019/12/10 (火) 13:37:56 - AA
ちなみに15−20bpくらいのオーバーラップ部分を持つ直鎖のPCR産物なら、産物をそのまま(精製などはなし)で、コンピ液に入れるだけで環状化できます。
(TakaraがPrimeStarでの使用例をWebに上げていますので参考にしてください)

(無題) 削除/引用
No.8481-3 - 2019/12/10 (火) 12:06:32 - iPCR
おおさん、ありがとうございます!

別にキナーゼを失活させなくてもいいですよね?
早速やってみます!

(無題) 削除/引用
No.8481-2 - 2019/12/10 (火) 11:51:38 - おお
ok

iPCRで、リン酸化後に精製せずにリガーゼ反応 削除/引用
No.8481-1 - 2019/12/10 (火) 11:06:59 - iPCR
iPCRで、リン酸化後にスピンカラムで精製せずにリガーゼ反応してもいいでしょうか?
バッファーは同じリガーゼバッファーですし...

いかがですか?つまりキナーゼを除くべきかと言うことになるかと思いますが...
すみません、めっちゃ初歩的な質問...

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