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(無題) 削除/引用 No.8507-3 - 2019/12/18 (水) 18:18:16 - M マクロファージ（というか、この場合はkupffer細胞）は、in vivoではアメーバ状の形態をとるので、細胞質の断片だけが切片にはいってきたりして、細胞数でカウントするのが困難な場合が多いと思います。細胞数ではなく、F4/80で染まっている面積で定量する方が容易かもしれません。どうしても細胞数で定量したい場合は、核をカウント（ヘマトキシリンでは染まりが悪いようなら、蛍光染色にした方が無難かもしれません）した上で、その中でF4/80陽性の細胞質で囲まれている核をカウントして比率を出せば、比較的客観的な評価になるかと思います。ちなみに、我々のラボでは、CD68を用いてヒトサンプルにおける定量をやってますが、面積で定量してます。ご参考まで。

(無題) 削除/引用 No.8507-2 - 2019/12/18 (水) 00:04:25 - クァws絵drftgy不二 4~6標本でそれぞれ陽性細胞数を目で数えるのが一番正攻法とおもいます。こうしなくてはいけないという標準的なルールがあるわけではないので、自分で、こういう場合は１個と数える、みたいに自分で規則を決めてやることと、バイアスがかかる心配があればn数を増やすとか、複数の人で同じ標本を独立にカウントして平均値を出すとか。（病理の研究論文とか見ると、そういうやり方で評価することがあるようです。）

免疫染色したF4/80陽性マクロファージの定量について 削除/引用 No.8507-1 - 2019/12/17 (火) 18:22:58 - kps いつも勉強させていただいています。 マウス肝臓組織をF4/80抗体で免疫染色し、ImageJを使用した定量を行おうと思っています。 いろいろな論文を調べたところ、単位面積当たりの陽性細胞数で表示しているものが多い印象です。 お聞きしたいのは、免疫染色で染まった部分をどのように「1個の細胞」と認識しているのかということです。 私の実験ではDAB染色を行っており、F4/80陽性マクロファージはひょろっとした茶色い線状であったり、 丸っこい形であったりと一定の形状ではありません。 また、対比染色としてヘマトキシリン染色をしていますが、マクロファージの 核とおぼしきものは見えたり見えなかったりします。 つまり、茶色く染まった部分をどのように個々の細胞と認識すればいいのかわかりません。 ImageJのAnalyze Particleを使用すると、とても細胞一つ一つを認識しているとは思えない結果が出てきます。 この手の画像解析だと100%正確に行うのは不可能だとは思うので、一般的な手法や皆様が通常行っている手法を教えていただけたらありがたいです。 よろしくお願いいたします。

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