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WBのろ紙の枚数について トピック削除
No.8515-TOPIC - 2019/12/19 (木) 17:00:22 - あいみょん
ウェスタンブロッティングをセミドライでやるときに、
ろ紙(ただの濾過する用のろ紙)って何枚くらい挟んでますか?


ろし四枚
ゲル
メンブレン
ろし四枚


みたいな感じでやっていますが、4枚もいらないんですかね?
枚数の数、増えると減るでなんかメリットデメリットが生じたりするのでしょうか?初歩的な質問かもしれませんが、ご教授お願いします。
 
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No.8515-9 - 2019/12/23 (月) 10:41:43 - あいみょん
みなさん返信ありがとうございます。
大変勉強になりました。具体的な厚みは指定されていたのですね。
今度からそうしてみます。

(無題) 削除/引用
No.8515-8 - 2019/12/19 (木) 23:38:37 - おお
>枚数の数、増えると減るでなんかメリットデメリットが生じたりするのでしょうか?

あ、そうそうこれについて。
ろ紙が多いほうがBuffer量が増えるのでBufferの劣化がある程度抑えられると思います。私は90分ぐらいやってましたので。

ろ紙が多いと上の電極が傾いたりして均一に流れるかという指摘もあります。まあそれは使っているブロッター次第かもしれません。上の電極が重いものだったり、バネのようなもので支えられて一定の圧がかけれるようなものもあったかなと思いますので。

また、ろ紙も色々厚さがありますので、枚数だけで語れるかどうかという話もあるかと思います。私は3MMを使ってます。

(無題) 削除/引用
No.8515-7 - 2019/12/19 (木) 22:06:01 - あws絵drftgyふじ
ミニゲル1枚とかで膜の表面積が小さくて紙が多すぎると蓋がグラグラして膜全体に均一に力がかからないかもね。

(無題) 削除/引用
No.8515-6 - 2019/12/19 (木) 20:17:20 - うどんげ
ATTOさんのページ
ttps://www.atto.co.jp/site/technical_info/blotting/Note_WB_transfer
>※トータルの厚みが4〜6oになるように枚数を調整してください。

そうしています。

(無題) 削除/引用
No.8515-5 - 2019/12/19 (木) 19:30:13 - おお
セミドライで両極にろし四枚づつでやってました。

(無題) 削除/引用
No.8515-4 - 2019/12/19 (木) 18:31:41 - PYK
私は2枚+2枚でやっていますね。
転写時間が長いのでしたら、乾燥を防ぐために4枚+4枚のがいいかもしれません。
私は通常30分から1時間しか転写しませんので。

(無題) 削除/引用
No.8515-3 - 2019/12/19 (木) 17:27:26 - み
ああセミドライか。
乾燥防止、バッファー供給のために多めの方が良いだろうな。

(無題) 削除/引用
No.8515-2 - 2019/12/19 (木) 17:25:49 - み
装置ごとに挟める枚数の制限は違う。
スポンジのへたり具合でも違ってくる。
スカスカでなければ1、2枚でも最悪大丈夫だと思うけど多い方が平らになるんじゃないの。感覚的にな。

WBのろ紙の枚数について 削除/引用
No.8515-1 - 2019/12/19 (木) 17:00:22 - あいみょん
ウェスタンブロッティングをセミドライでやるときに、
ろ紙(ただの濾過する用のろ紙)って何枚くらい挟んでますか?


ろし四枚
ゲル
メンブレン
ろし四枚


みたいな感じでやっていますが、4枚もいらないんですかね?
枚数の数、増えると減るでなんかメリットデメリットが生じたりするのでしょうか?初歩的な質問かもしれませんが、ご教授お願いします。

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