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(無題) 削除/引用 No.8543-5 - 2020/01/07 (火) 12:44:21 - asan http://lifescience.toyobo.co.jp/embodiment/detail.php?embodiment_id=63 これとほぼおなじような感じのプロトコールでやってますが、普通にうまくいきます。 一晩やらなくても1-2時間ぐらいでもちゃんと溶出できればいいと思います。 Crudeなサンプルなので、あまり長期間保存には向きませんけどね。

(無題) 削除/引用 No.8543-4 - 2020/01/06 (月) 21:43:01 - mp proK使うのもいいけど、一番簡単なのはアルカリで熱処理した後Trisで中和かな。ネット上にもレシピはでてます。

(無題) 削除/引用 No.8543-3 - 2020/01/06 (月) 18:23:16 - AP そういう製品があるというだけで、それじゃなきゃworkしないというわけでもないでしょう。ProKすらいらないかも。 むかし、実験書で見たのは1% くらいだったかのNP-40だったかTx-100だったか。 PCR用の簡易DNA抽出法だったら、もし事情が許すなら、Chelex-100 (InstaGene)を使う方法をおすすめする。簡便で失敗がない。

(無題) 削除/引用 No.8543-2 - 2020/01/06 (月) 17:30:14 - AA ProKは結構robustな酵素なんで水に溶かしても培養細胞くらい溶かすと思います。 0.01M Tris/0.1%SDS/1mM EDTA、くらいではないでしょうか。 溶けたら95-100度で5分で失活させればそのままPCRに使えると思います。 直後にPCRに行くことを考えるとEDTAはなくてもいいかもしれません。

自作 lysis bufferレシピ; direct PCR from培養細胞 削除/引用 No.8543-1 - 2020/01/06 (月) 16:49:51 - xxx 哺乳類の培養細胞にProK入のLysis bufferを入れて、失活させたのちに、溶液を直接PCRでジェノタイピングする商品がありますよね。 自作したいのですが、Lysisi bufffer組成を教えてもらえないでしょうか？ どこかで、見た覚えがあるのですが、、確かTritonXとEDTAとProKくらいしか入ってなかったような。。。

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