Bio Technical フォーラム

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HIFプロリン水酸化 (PHD2)活性 トピック削除
No.874-TOPIC - 2012/08/27 (月) 18:21:08 - がちんこ
お世話になります。
HIFプロリン水酸化酵素(PHD2)活性の阻害を見ようとしておりますが、簡便な方法が見つかりません。以前は放射ラベルの2-oxoglutarateなどを使っていたようですが、特異性に問題があり、最近の論文では反応で水酸化させたHIFペプチドをさらにVHLで認識させているようです。
どなたか、水酸化HIF1を認識する抗体を使ってPHD活性を測定した事がある方はいらっしゃいませんか?リコンビナントVHLを使わなくても水酸化プロリンを認識する抗体の方が簡便だと思うのですが・・・
なにか情報がありましたら、宜しくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.874-4 - 2012/08/28 (火) 15:21:44 - おお
ちょっと細かい調査をせずに、また知識がない状態で無責任なかいとうですが、VHLのけいはタンパク(ペプチド)-タンパク相互作用で検出しているわけですから、検出感度としてタンパク(ペプチド)-抗体の検出のレベルに匹敵する(少なくとも抗体の特異性はほかのタンパク相互作用より可也強いこともありますし)ぐらいではないかとおもいますが、いかがなもんでしょう。
ただし、まだ系が樹立していないなら、VHLリコンビナントを準備して実験をセットアップするのと同じぐらいの時間が系の樹立に必要かもしれません。抗体も市販のものが複数あればどれがいいか検討する必要も出てくるかもしれませんし。

とまあ大雑把に無責任に答えるとこうなります。

Good luck!

HIFプロリン水酸化 (PHD2)活性 削除/引用
No.874-3 - 2012/08/28 (火) 10:31:46 - がちんこ
レス有難うございました。
水酸化HIFを認識する抗体はいくつかあるのですが、これを利用してHIFプロリン水酸化酵素(PHD)活性を測定できるかどうかについての質問です。
検索はかなりやったつもりですが、出てきません。
チャレンジする価値があるかどうか、ご意見をお願いします。

(無題) 削除/引用
No.874-2 - 2012/08/28 (火) 03:40:47 - 抗体
"hydroxy hif1 antibody"で検索するといくつかあるみたいですが

HIFプロリン水酸化 (PHD2)活性 削除/引用
No.874-1 - 2012/08/27 (月) 18:21:08 - がちんこ
お世話になります。
HIFプロリン水酸化酵素(PHD2)活性の阻害を見ようとしておりますが、簡便な方法が見つかりません。以前は放射ラベルの2-oxoglutarateなどを使っていたようですが、特異性に問題があり、最近の論文では反応で水酸化させたHIFペプチドをさらにVHLで認識させているようです。
どなたか、水酸化HIF1を認識する抗体を使ってPHD活性を測定した事がある方はいらっしゃいませんか?リコンビナントVHLを使わなくても水酸化プロリンを認識する抗体の方が簡便だと思うのですが・・・
なにか情報がありましたら、宜しくお願いします。

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