全4件 ( 1 〜 4 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.8848-4 - 2020/05/13 (水) 15:15:59 - おお https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fendo.2018.00402/full miRNAの翻訳抑制メカニズムが明らかになった頃は標的mRNAは減少しないのでRT-PCRは意味がないと言われていてそうであることは間違えないです。実際の実験もそういうふうにデザインされていたとおもいます。 でもマイクロアレーでmRNAとmiRNAで負の相関を見る人が結構出てきて、突っ込んで聞いてみるとどうやら分解されるケースもあるようだとかあまり端切れは良くないけどそういう人も結構出てきてなんだかなぁと言う感じはあったのですが、その時は諸説があることはあったようです。 翻訳抑制されるときの実験系に関する指摘はそのとおりだとけど、事あるごとに研究の進展など見てみるようにしないとなと思う次第です。

(無題) 削除/引用 No.8848-3 - 2020/05/13 (水) 15:07:08 - のんたん APさま > 一般にガイドRNAが標的に対してパーフェクトマッチだと切断に働き、数個のミスマッチがあると翻訳阻害に働く ありがとうございます。 私もこのことをどこかで読みました。完全マッチでも翻訳抑制が起こるのはAgo2の部位特異的リン酸化が起きてるのかもですね！ プライマーのデザインに関しても、納得です。 ありがとうございました！

(無題) 削除/引用 No.8848-2 - 2020/05/13 (水) 13:58:39 - AP そのとおり。 shRNAで標的RNAの切断を狙ってサイレンシングしようとしたら、たしかに表現型は出たけど、mRNA量は減少していなかったというケースを聞いた。でも、タンパク質量は減っていて、どうやらRNA切断ではなく翻訳阻害になっていたようだ。一般にガイドRNAが標的に対してパーフェクトマッチだと切断に働き、数個のミスマッチがあると翻訳阻害に働くので、意図に反して、設計したshRNAが実際の標的配列と完全一致していなかったのかもしれない。 それとは別に気をつけるべきは、RT-PCRで標的RNA量の減少を評価するなら、dsRNAの標的配列を間に挟んでむようなPCRをデザインすべき。理由はいわずもがな

miRNAによるmRNA分解、翻訳抑制への質問 削除/引用 No.8848-1 - 2020/05/13 (水) 09:17:35 - のんたん いつも勉強させてもらっています。 miRNAの実験を計画していますが、標的mRNAへのメカニズムにはmRNA分解と翻訳抑制があるようです。 ふとした疑問なのですが、後者の場合、標的mRNAは減少しないという理解になります。 たとえばqRT-PCRを行ったら、後者がメカニズムの場合、標的mRNAは減少しないでしょうか？ どちらもタンパク質は減少するかと思いますが...

全4件 ( 1 〜 4 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---