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(無題) 削除/引用 No.9057-8 - 2020/08/05 (水) 12:45:45 - toto Alexa405はつかったことないです。分子吸光が350の2倍くらいあるので良さそうですが、量子収率が出てないのでなんともいえません。他のメーカーだと、たとえば、BiotiumのCF405SはAlexa405より明るいといってます。 Alexaのシリーズでダメだったのは430と555でした。568は2次抗体で普通に使ってますが、Phallodin568はダメでしたか。なぜでしょうね。そういえば、こちらもCF568のほうが退色しにくく明るいとメーカーはいってます。が、色素は実際に使ってみないとわかりません。ほんの少量でいいので、メーカーはサンプル出荷してほしいものです。

(無題) 削除/引用 No.9057-7 - 2020/08/05 (水) 11:20:57 - 考える干支 toto様 ありがとうございます Alexa405の使用感はどうなのか、実際に使用されたことはありますか？ 今後、検討してみたいと思います Alexaシリーズはモノによって使用感がまちまちですね 私は568の二次抗体はよくworkすると思いますが Phalloidin-Alexa568は２、３回買いましたがworkしませんでした （488はバッチリ染まる条件で）

(無題) 削除/引用 No.9057-6 - 2020/08/04 (火) 16:20:08 - toto もちろん、350nmあたりのレーザーがあればとれるはずですが、やったことはありません。見たことないですが出てはいます。水銀光でDAPIのフィルタキューブを使って撮影したことは、遙か昔にあります。確かに暗かったですが、要はs/nなので、特にダメだった記憶もありません。論文にしたかは覚えてないですが。 昔はこのあたりの波長の色素はこれしかなかったで350をそのときは買いましたが、今は、Alexa Fluor405があるので、これにするのじゃないですかね。350は水銀ランプ用に出てるのかな。 なおAlexaの色素の中には使えないのも結構あるのでご注意を。

(無題) 削除/引用 No.9057-5 - 2020/08/04 (火) 14:21:46 - 考える干支 toto様 Alexa350に適正なレーザーなどのセットを用いた場合の 蛍光シグナルについて、どうなのか？とお聞きしている次第です 一応、DAPIのセットで見えるとあると思うのですが・・・ https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/life-science/cell-analysis/fluorophores/alexa-fluor-350.html

(無題) 削除/引用 No.9057-4 - 2020/08/04 (火) 13:57:43 - toto というか、この色素は普通の共焦点についてる405nmレーザーではほぼ励起できないので、もっと短波長のレーザーを使うか、水銀光でDAPIよりも短い波長セット（XF403等）で撮るしかないです。 この試薬は他の汎用レーザーでは事実上光らないので、たとえばマウスモノクロ抗体で染めて2次抗体-Alexa488等で染色したサンプルを一旦、この色素を10倍薄めたものをかけて、ブロックするのに使ってます。無駄に贅沢な使い方ですが、このあとでPFAで固めて、再度別のモノクロ抗体-Alexa568等で染め分けると、おそらく抗体の特性が同じなので、最初の１次抗体をよくブロックしてくれて、同種抗体で染め分けができて便利です。

(無題) 削除/引用 No.9057-3 - 2020/08/04 (火) 13:06:18 - 考える干支 ありがとうございます Alexa350-phalloidinは使用したことあるのですが これは本当に検出できてる？って感じでした ある程度発現量が多いActinですらこうなのだから、 他のタンパク質などはいかがなものなのでしょうか 個人的には、Alexa350で強いしがるが検出できている論文の著者は あまり信用していません、言い過ぎです、すみません

(無題) 削除/引用 No.9057-2 - 2020/08/04 (火) 12:58:55 - み いちおうAlexa350-phalloidinで検出したことはあるけど暗かった。 https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/life-science/cell-analysis/fluorophores/alexa-fluor-350.html このURLで調べると元々輝度はかなり弱そうだね。

Alexa350について 削除/引用 No.9057-1 - 2020/08/04 (火) 12:37:20 - 考える干支 Alexa350のラベルされたもので、 顕微鏡下で試料がうまく光って見えたって方いらっしゃいますか？ 文献における免疫染色像やカタログなどでは、よく像を見ますが 私は一度も光って見えたことがありません 文献で見たとかではなく、実際に使用された方で この抗体で染めたとき見えたよって例があれば ぜひ教えていただきたいです よろしくお願いします

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