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オルガノイドの免疫染色 トピック削除
No.9071-TOPIC - 2020/08/09 (日) 21:54:28 - べジ
オルガノイドの免疫染色に関して質問です。
ご経験ある方いらっしゃたら教えてください。

現在、ある組織のオルガノイド培養に着手していますが
オルガノイド組織をマトリゲルから取り出して免疫染色することは可能ですか?論文ではやっていますが、マトリゲルから取り出すときの手法がよくわかりません。

その場合、通常通り、マトリゲルを壊してオルガノイドをpelleとして回収して
パラフィンか凍結固定すればよいのでしょうか?

どうぞ、よろしくお願いたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.9071-7 - 2020/08/10 (月) 22:53:22 - べジ
ありがとうございます。
参考になりました。

(無題) 削除/引用
No.9071-6 - 2020/08/10 (月) 22:13:42 - おお
>[Re:5] べジさんは書きました :
> みなさん、ありがとうございます。
>
> ちなみに、遠心で回収した後でも通常通り
> オルガノイドの形を維持したままで観察できるものなのでしょうか。
>
> また、溶解液を使用する場合は、マトリゲルを溶かして
> ピンセットで目視できるオルガノイドを直接取り出して固定する、
> といった形でしょうか。
>
> ご教授お願いいたします。

数百gで落ちましたのでダメージがなく回収できました。共同研究していたところはパラフィン包埋を作っていました。

(無題) 削除/引用
No.9071-5 - 2020/08/10 (月) 13:42:53 - べジ
みなさん、ありがとうございます。

ちなみに、遠心で回収した後でも通常通り
オルガノイドの形を維持したままで観察できるものなのでしょうか。

また、溶解液を使用する場合は、マトリゲルを溶かして
ピンセットで目視できるオルガノイドを直接取り出して固定する、
といった形でしょうか。

ご教授お願いいたします。

(無題) 削除/引用
No.9071-4 - 2020/08/10 (月) 13:11:12 - dfyu
専用のマトリゲル溶解液(cell releasing solution)がうってるのでそれを使うことができると思います。詳細はメーカーのサイトなどで実験例などが説明されていると思います。
またmatrigelごとOTCコンパウンドで包埋、凍結して、凍結切片の形で観察することも何かのサイトか本で見たことあります。パラフィンはちょっとどうかなと思います。

(無題) 削除/引用
No.9071-3 - 2020/08/10 (月) 04:05:51 - おお
濃度によるけど。遠心で回収していた。

(無題) 削除/引用
No.9071-2 - 2020/08/09 (日) 21:57:16 - べジ
pelle→pelletです。すいません。

オルガノイドの免疫染色 削除/引用
No.9071-1 - 2020/08/09 (日) 21:54:28 - べジ
オルガノイドの免疫染色に関して質問です。
ご経験ある方いらっしゃたら教えてください。

現在、ある組織のオルガノイド培養に着手していますが
オルガノイド組織をマトリゲルから取り出して免疫染色することは可能ですか?論文ではやっていますが、マトリゲルから取り出すときの手法がよくわかりません。

その場合、通常通り、マトリゲルを壊してオルガノイドをpelleとして回収して
パラフィンか凍結固定すればよいのでしょうか?

どうぞ、よろしくお願いたします。

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