Bio Technical フォーラム

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分化マーカーが検出できない 培養細胞 トピック削除
No.9090-TOPIC - 2020/08/21 (金) 15:37:26 - あいみゃん
お世話になっております。
褐色脂肪細胞を培養しているのですが、UCP1などの分化後のマーカーがリアルタイムPCRにて検出することができません。メディウムの調整は間違っていないと思いますし、顕微鏡で目視では脂肪滴を有する細胞を確認できています。
どのような原因が考えられるでしょうか?

私が考えているのは、蒔いた細胞がwellに対して少ない(そのため分化準備不十分のまま分化させている)のでは?と思っています。これも原因になりうるでしょうか?

あるいはP30を使っている点でしょうか・・・・?いただきものなのでこれはどうしようもできませんが。。。。。
 
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(無題) 削除/引用
No.9090-4 - 2020/08/22 (土) 01:25:36 - おお
経験ある方のコメントがあれば助かるのだけど、そもそも未分化でqPCRして全く検出できないものなんでしょうか。参考にしている論文があれば確認してみてもいいかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.9090-3 - 2020/08/21 (金) 23:08:14 - あいみゃん
やはりコンフルエントに達していないのが原因でしょうか?
目視で変化が起きているので安心していました。

はい、先方のプロトコルどおりT3を入れております。
PGC1aも発現なしです。

(無題) 削除/引用
No.9090-2 - 2020/08/21 (金) 15:52:58 - み
褐色自防組織由来のpreadipocytesから分化させているのでしょうか?
preadipocytesや3t3-L1などからの白色脂肪細胞への分化もそうですけど、コンフルエントにさせた後、数日維持培養してから分化開始しないと分化効率悪いですよね。
「蒔いた細胞がwellに対して少ない」というコメントが気になります。

それと、褐色脂肪への分化はT3とか甲状腺ホルモンなど必要だったと思いますが、その辺りの条件は問題ないですか?

PGC-1の誘導はどうですか?

頂きものということは先方に詳細なプロトコールが存在するのでは?

分化マーカーが検出できない 培養細胞 削除/引用
No.9090-1 - 2020/08/21 (金) 15:37:26 - あいみゃん
お世話になっております。
褐色脂肪細胞を培養しているのですが、UCP1などの分化後のマーカーがリアルタイムPCRにて検出することができません。メディウムの調整は間違っていないと思いますし、顕微鏡で目視では脂肪滴を有する細胞を確認できています。
どのような原因が考えられるでしょうか?

私が考えているのは、蒔いた細胞がwellに対して少ない(そのため分化準備不十分のまま分化させている)のでは?と思っています。これも原因になりうるでしょうか?

あるいはP30を使っている点でしょうか・・・・?いただきものなのでこれはどうしようもできませんが。。。。。

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