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(無題) 削除/引用 No.9113-4 - 2020/08/28 (金) 16:05:20 - G25 参考過去トピ http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2/biotechforum.cgi?mode=view;Code=1397

(無題) 削除/引用 No.9113-3 - 2020/08/28 (金) 15:50:00 - G25 グリセロールストックで保存して必要時にシングルコロニーから起こし直すと、発現しなくなるなど性質が変わってしまうことがよくあるようです。それを回避するため、未保存のカルチャーからスターターカルチャーを作成、小分けして冷凍保存し、必要時は小分けを一本まるごとをスターターとして本培養するといいらしい。 今回は、可溶性から不溶性になったということですが、タンパク質発現速度が大きくなると不溶化に転じる可能性があります。それが保存中に菌株の性質が変わったせいか、ほかの要因かはわかりませんが、とにかくスピードを下げるような措置をしてみては。 温度をもっと下げる。18℃から10 ℃くらいまで、 栄養の乏しい培地にする。例えばM9 など

(無題) 削除/引用 No.9113-2 - 2020/08/28 (金) 09:23:10 - Skeptic 気温が高いからインキュベーター内の温度が20℃より高くなっているのでは？

大腸菌発現誘導について 削除/引用 No.9113-1 - 2020/08/27 (木) 15:26:57 - うに 初心者です。 現在大腸菌を用いた組み換えタンパク質の発現を行っています。 使用しているベクターはpGEX-6P-1で目的タンパクのN末にGST tagをつけています。 昨年度実験をした際は、20℃・IPTG0.1mM・18hで目的タンパク質が可溶性画分に存在し、グルタチオンセファロースを用いて何度も精製できていました。 今年に入って同じ条件で誘導をかけると目的タンパク質が全て不溶性画分に発現してしまうようになりました。プラスミドを抽出し、形質転換しなおしましたが状況は変わらないままです。 このようなことはよくあることなのでしょうか。 また、何か解決策等ありましたらよろしくお願い致します。

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