Bio Technical フォーラム

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IP-WB extra bands トピック削除
No.9168-TOPIC - 2020/09/19 (土) 02:06:40 - おお
IP WBをすると期待する場所以外にもバンドが出てきたりして、コントロールにも出ていることも結構あるのですが、皆さんは許容範囲とか考えたことがありますか?
 
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No.9168-4 - 2020/10/03 (土) 07:16:05 - おお
すみません、お礼が疎かになっていました。ありがとうございました。

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No.9168-3 - 2020/09/19 (土) 15:23:25 - cvgふ
control IgGのIP物と抗体のIP物を比較して後者の方のみに検出されたバンドを意味のあるもの、また両方に検出されたものはとりあえず非特異的なものと判断して先に進めるものと思います。許容範囲とかそういう捉え方ではなく(そういう非特異的なシグナルが出るであろうことを想定して)そうした非特異的なバンドと本物のバンドを識別するためにcontrolのIgGでもIPをするのです。

(無題) 削除/引用
No.9168-2 - 2020/09/19 (土) 10:45:56 - み
免疫沈降に使用している抗体が落としてしまっているのか、ビーズなどに結合して回収されたのか。単に変性したりして沈降画分に来たのか。
検出も1次抗体依存的なのか2次抗体が直接反応しているのか。
原因はケースバイケース。

落としたいものがコントロールと比較して落とせていて、それが検出できれば取り敢えずIP能力は少なからずあるということでしょう。その状況下で根拠を示しつつ何を示すかですよね。
どんな抗体でも他のものが見えてなくてもクロスリアクトしてるでしょう。
別にIP-WBに限ったことではなく、染色でもクロスのシグナルは得られる。
WBでそれらしいサイズに出ても標的とは異なる蛋白だったことは幾らでもある。

IP-WB extra bands 削除/引用
No.9168-1 - 2020/09/19 (土) 02:06:40 - おお
IP WBをすると期待する場所以外にもバンドが出てきたりして、コントロールにも出ていることも結構あるのですが、皆さんは許容範囲とか考えたことがありますか?

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