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(無題) 削除/引用 No.9211-8 - 2020/10/12 (月) 18:24:57 - tts > マイクロプレート用のECLって、ネットで探したけど、見つかりませんでした。 私のラボでThermo社から出ているELISA用発光基質を使用しています。 使用感は悪くありません。 https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/37069#/37069

(無題) 削除/引用 No.9211-7 - 2020/10/12 (月) 04:28:11 - よろしく ルミノさんの御指摘はごもっともです。 今回は、プレートが一枚で済むので、割り切って次のようにします。 空のプレートを先にリーダーに入れて測定させて、音を聞く。 連続して入れられるシングルチャンネルのぴぺったーで、本番のプレートに、ウェル順が同じになるように基質を入れる。 適当な待ち時間の後に、測定する。 これでダメなら、高価で、輸入待ち時間が長いのが大きな欠点の、時間分解蛍光(商品名Delfia)を使います。 おお様 重ねての情報提供をありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.9211-6 - 2020/10/12 (月) 00:14:48 - おお https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5948693/ これも参考になるのでは？

(無題) 削除/引用 No.9211-5 - 2020/10/11 (日) 23:41:27 - ルミノ 希釈するのはいいとして、 ルミノール反応は普通、反応初期に一過的に上がって、その後急激に落ちるので、発色法のようにエンドポイントで測定するわけにはいきません。インジェクター付きのリーダーで基質投入直後の発光量を測定するとか、長寿命の反応液(発光強度が長時間一定に持続する市販品)を使わないといけませんが、考慮に入れているかしら。

(無題) 削除/引用 No.9211-4 - 2020/10/11 (日) 14:01:15 - おお >[Re:3] よろしくさんは書きました : > おお様 > 自作レシピのECLって、GEヘルス (昔のアマシャム)のシリーズでいうと、 > 一番安いものと同程度の感度ぐらいでしょうか？ > メーカーがレシピを公開しているかはわかりませんが、ECLはお示ししたレシピがベースになっていると思います。ECL PlusとかECLprimeとかはおそらく更に感度がよく気質がルミノールではなくそれより強い発光を放すものを使っていると思います。 ＞マイクロプレート用のECLって、ネットで探したけど、見つかりませんでした。 https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Roche/Bulletin/1/11582950001bul.pdf

(無題) 削除/引用 No.9211-3 - 2020/10/11 (日) 11:51:56 - よろしく おお様 ありがとうございます。 とりあえず今手元にある、GEヘルスのECL prime を 0.1Mのtris hcl で2倍から4倍に希釈して使ってみます。 マイクロプレート用のECLって、ネットで探したけど、見つかりませんでした。 自作レシピのECLって、GEヘルス (昔のアマシャム)のシリーズでいうと、 一番安いものと同程度の感度ぐらいでしょうか？ もし自作してる方がいらっしゃれば、御意見いただけると参考になり、 ありがたいです。

(無題) 削除/引用 No.9211-2 - 2020/10/11 (日) 03:17:00 - おお https://bitesizebio.com/8970/how-to-make-your-own-ecl/ キット買うより自分で調整したほうがいいのでは？ HRP 検出はWB用のものを使おうとしていますか？ ELISA用もあると思うのでそういう商品のプロトコールとか確認しましたか？ また、蛍光というてもあるかと。 https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/protein-biology/protein-assays-analysis/elisa/elisa-reagents-buffers/enzyme-substrates-elisa.html

ECLの希釈のための水かバッファ 削除/引用 No.9211-1 - 2020/10/11 (日) 00:16:51 - よろしく よろしくお願いします ビオチン、ストレプトアビジン、HRPからなる、96ウェルマイクロプレートを用いた、ある特殊なアッセイを立ち上げようとしています。 HRPの基質として、TMBを用いたところ、感度が足りません。 そこでECLを基質にできないかと考えました。 パーキンエルマ社のArvoという測定可能な機器はあります。 質問は、A液とB液を混ぜる際に、水を入れて希釈しても発光できるかどうか、あるいは何か良い希釈液があるかどうかかというです。理由は、各ウェルの中に150マイクロリットル入れる必要があり、マイクロプレート一枚あたりに、7.5mlのA液とB液が必要になり、ランニングコストがじゃさむからです。 以前にECLのじさの話があったかと思います。どなたかレシピを教えていただければ、自作のバッファが使えると思います。

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