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(無題) 削除/引用 No.9231-4 - 2020/10/20 (火) 00:07:03 - おお 加えて、複数のバンドが出たとして、過剰発現のサイズと一致しないバンドが非特異だとは限りません。

(無題) 削除/引用 No.9231-3 - 2020/10/20 (火) 00:04:43 - おお KOやKDが困難だったころ、発現ベクターで蛋白を発現してその比較で特異的なバンドを同定するというのは一つの手段としてよくやられていたとおもいます。まれに強制的に発現した蛋白がEndoと違うサイズになったりすることがあるようですが。

(無題) 削除/引用 No.9231-2 - 2020/10/19 (月) 19:27:25 - MJ こんにちは。 こういった場合は非常に厄介ですね。 取りうる手段としては、多数存在すると思いますが、 Sさんの言う通り、過剰発現系を作成するのもよろしいかと思います。 ただ、うまくいかない場合もあるので、他の抗体でも試してみるとか、 一次抗体を入れてみないとか等等で状況証拠を集めていくしかないように思います。 ご存じかもしれませんが、サンタクルズは一部の抗体サンプルをもらえるのですが、お試しになりました？

ポリクローナル抗体を使う際のコントロールについて 削除/引用 No.9231-1 - 2020/10/18 (日) 21:25:49 - S ポリクローナル抗体を用いて、ウエスタンブロッティングで癌細胞株におけるあるタンパクの検出を試みたところ、複数のバンドが検出されました。 そこで、本当のバンドを知るために目的タンパク遺伝子を導入した293T細胞を溶かしたものゲルに流し、この抗体で検出したバンドの位置を目的タンパクの分子量であると考えました。このコントロールの置き方は適切なのでしょうか？用いている癌細胞株で目的遺伝子のノックダウンもしくはノックアウト細胞を作るべきでしょうか？ 細胞により検出されるバンドの位置が異なる可能性などあるのでしょうか？教えていただけますと幸いです。

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