BioTechnicalフォーラム [細胞の不死化を誘導する遺伝子]

細胞の不死化を誘導する遺伝子

No.929-TOPIC - 2012/09/14 (金) 12:34:40 - kt

現在、ヒト初代培養細胞を不死化させ、株化したいと考えております。
株化するためにはがん遺伝子等を導入すればよい、というのはわかりますが、
どのようながん遺伝子を導入するのが一般的なのでしょうか。

今頭に浮かんでいるのはRASやSV40のラージT抗原ですが、その他に何かありますでしょうか？

素人質問で申し訳ありませんが、ご教授よろしくお願いいたします。
　

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No.929-11 - 2012/09/18 (火) 15:55:30 - mon

一応、hTERTだけで不死化したcell lineは販売されています。
http://www.atcc.org/CulturesandProducts/CellBiology/hTERTImmortalizedCellLines/tabid/658/Default.aspx
樹立効率は相当悪いと思いますし、おそらく何らかのMutationあるいはエピジェネティックな変化が起きていると思います。
MPさん、論文紹介ありがとうございます。

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No.929-10 - 2012/09/18 (火) 15:27:00 - MP

> うまくいくかどうかは分かりませんが、とりあえずhTERTでスタートさせてみようと思います。

細胞種にもよるのかもしれませんが、hTERTだけだといずれ増殖が止まってしまうのでは、、、？

Cancer Sci. 2007 Feb;98(2):147-54.
Efficient immortalization of primary human cells by p16INK4a-specific short hairpin RNA or Bmi-1, combined with introduction of hTERT.

上記の論文など参考にされてみてください。

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No.929-9 - 2012/09/18 (火) 14:59:45 - kt

おお様、MP様

ご意見ありがとうございます。
導入する遺伝子は異なったとしても不死化細胞ができれば特に気にすることはないかな、と考えていたのですが、実は導入する遺伝子も結構重要なのですね。

普段不死化された細胞ばかり使っているにもかかわらず、いざ不死化させようとすると分からないことばかりでしたので、皆様の貴重なご意見に感謝致します。

うまくいくかどうかは分かりませんが、とりあえずhTERTでスタートさせてみようと思います。

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No.929-7 - 2012/09/18 (火) 14:14:06 - おお

>[Re:6] MPさんは書きました :
> LargeTはかなり強力なので、細胞の性質が相当変わってしまう気がします。

その点は同意します。

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No.929-6 - 2012/09/18 (火) 12:17:50 - MP

LargeTはかなり強力なので、細胞の性質が相当変わってしまう気がします。
hTERT + Bmi1 なんかはどうでしょう？

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No.929-5 - 2012/09/17 (月) 15:29:24 - おお

hTERTはいいあいであだとおもいます。SV40LargeTはテロメレ-スがクローニングするまえから、第一選択として使われていたと思います。テロメレースはあまりフォローをしていませんが、細胞種によってはうまくふしかできなかったというほうこくもいくつか聞いたことがあります。

293はアデノで形質転換させたものです。またB細胞とかはEBVをよくつかいますね。

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No.929-4 - 2012/09/17 (月) 10:21:16 - kt

mon様

ご返信ありがとうございます。
確かにRASはがん化ですね。
Myc、hTERTで検討してみたいと思います。
ありがとうございました。

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No.929-3 - 2012/09/17 (月) 09:00:51 - ab

mycやhTERTでお勧めのキットが、あれば教えてください。

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No.929-2 - 2012/09/14 (金) 12:58:18 - mon

RASよりmycの方がマイルド。あとhTERT.
RASだと不死化というよりがん化に近いかも。