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蛍光顕微鏡 DAPIで染まらないGFPの蛍光 トピック削除
No.9380-TOPIC - 2020/12/18 (金) 03:10:22 - GFP
細胞内でGFPを発現させ、それを固定しスライドに封入して蛍光顕微鏡で観察した際に
緑色の蛍光波長で光ってる部分がDAPIで染まっていないことがあります。
これは単にDAPIで染まっていないだけなのでしょうか?


その緑色の蛍光波長で光ってる部分はちょうど細胞質ぐらいの大きさではあります。
また近くにある細胞は普通にDAPIで染まっています。
 
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(無題) 削除/引用
No.9380-7 - 2020/12/18 (金) 18:46:56 - あの
高倍率だと被写界深度が浅い

細胞質にピントがあうと、核にはピントがあっていないこともありえる。
細胞質と核の両方にピントがあうこともありえる。

蛍光顕微鏡ではなく、共焦点で
ピンホールやゲインをいじって、二次元画像をとるか、
三次元(zスタック)のが画像を撮影してみたら?

(無題) 削除/引用
No.9380-6 - 2020/12/18 (金) 16:44:49 - GFP
>[Re:2] あのさんは書きました :
> レンズが高倍率のときじゃないですか?
> 被写界深度という言葉の意味を勉強しましょう。

そうです100倍で見てます。
被写界深度について調べてみましたが、いまいち自分質問とのつながりが見えないので教えていただけると嬉しいです。

(無題) 削除/引用
No.9380-5 - 2020/12/18 (金) 16:35:19 - GFP
>[Re:4] たろーさんは書きました :
> ついでに顕微鏡の種類も書いていただけると助かります。エピとか共焦点とか。

すみません詳しくなくてわからないのですがキーエンスのオールインワン蛍光顕微鏡 BZ-X800です。
共焦点ではないと思います。

(無題) 削除/引用
No.9380-4 - 2020/12/18 (金) 04:04:11 - たろー
ついでに顕微鏡の種類も書いていただけると助かります。エピとか共焦点とか。

(無題) 削除/引用
No.9380-3 - 2020/12/18 (金) 04:02:27 - おお
コンフォーカルだったら観察している平面に核がないだけというのもありうると思う。

(無題) 削除/引用
No.9380-2 - 2020/12/18 (金) 03:56:07 - あの
レンズが高倍率のときじゃないですか?
被写界深度という言葉の意味を勉強しましょう。

蛍光顕微鏡 DAPIで染まらないGFPの蛍光 削除/引用
No.9380-1 - 2020/12/18 (金) 03:10:22 - GFP
細胞内でGFPを発現させ、それを固定しスライドに封入して蛍光顕微鏡で観察した際に
緑色の蛍光波長で光ってる部分がDAPIで染まっていないことがあります。
これは単にDAPIで染まっていないだけなのでしょうか?


その緑色の蛍光波長で光ってる部分はちょうど細胞質ぐらいの大きさではあります。
また近くにある細胞は普通にDAPIで染まっています。

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