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(無題) 削除/引用 No.9434-8 - 2021/01/20 (水) 15:59:05 - おお >[Re:7] 実験始めました。さんは書きました : > キットはマウスIgA ELISA キットを使用してます。 ま、そらそうですけど種が違うから反応しない保証はないです（ちゃんとした処理しているとか、工夫しているとかない場合は）。 キットに特異性についてどこかに書いてあると思いますよ。なければメーカーに聞けばいいし。またFCSつかってバックグランドがほとんどなければ牛のIgAには反応してないでしょう。過去の生データーを見てみればどうか。 で文献調べてっていったよね。 ４件ぐらいみて、 PMSFと大豆トリプシンインヒビターのコンビネーションが２件 PMSF単独が１件 特に言及してないのが１件 FCSが使えるならPMSFを併用してもいいのではないかと思うが。

(無題) 削除/引用 No.9434-7 - 2021/01/20 (水) 15:19:24 - 実験始めました。 キットはマウスIgA ELISA キットを使用してます。

(無題) 削除/引用 No.9434-6 - 2021/01/20 (水) 13:22:56 - 実験始めました。 キットのプロトコルには便のサンプル調製方法が記載されてませんでした。 過去の論文を参考にして、ウシ胎児血清をPBSに混ぜたものの使用を検討しました。 便中のIgAの量ですが、マウスの環境によるIgAの差異をみたいので、ELISAで測定出来れば、全サンプル同じ条件でと考えておりました。 いつもご教授ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.9434-5 - 2021/01/19 (火) 01:14:08 - おお そういえば血清にIgAが含まれてますね。そのキットの特異性はどうなってますか？血清を使うのはそのキットのプロトコールに書かれているのですか？

(無題) 削除/引用 No.9434-4 - 2021/01/19 (火) 00:44:11 - おお >[Re:3] 実験はじめました。さんは書きました : > ありがとうございました。とても参考になりました。キットを注文しました。 > 希釈率の検討を含めて、まずインヒビター無しで、実験してみようと思います。 それは勝手だけど、結果が出たとしてどのように評価するのですか（どのようにしてプロテアーゼインヒビターが必要だったかどうか判断を下すのですか）。まずは複数の類似した文献を探しなさい。 ＞ウシ胎児血清はプロテアーゼインヒビター トリプシンインヒビター（蛋白）が含まれてます。どのようなプロテアーゼが阻害されるのか一度調べてみるといいでしょう。

(無題) 削除/引用 No.9434-3 - 2021/01/18 (月) 23:00:05 - 実験はじめました。 ありがとうございました。とても参考になりました。キットを注文しました。 希釈率の検討を含めて、まずインヒビター無しで、実験してみようと思います。もう一つ質問なのですが、便を抽出する際にアジ化ナトリウム、FCSをPBSで希釈したものを使おうと思います。ウシ胎児血清はプロテアーゼインヒビターの役割をしますか？　血清はプロテアーゼから保護する働きがあると聞いたので。

(無題) 削除/引用 No.9434-2 - 2021/01/17 (日) 11:04:37 - V 初心者の方ならば、調整済みの試薬や実験手順書からなるmous IgA 測定用 ELISA Kitが市販されているので、そうしたものを購入されるのが良いと思います。分泌型IgAはもともと分泌片を持つので、腸内細菌由来のproteinaseからは保護されているものと思いますが、完全ではないかもしれないので、もし必要と思われればproteinase inhibitorを入れることも検討ください。メーカーを問わずassayに影響を与えないものならば良いと思います。購入したメーカーのカスタマーサービスに問い合わせてば具体的なことを教えてくれると思います。

ELISA によるIgA測定 削除/引用 No.9434-1 - 2021/01/16 (土) 23:54:49 - 実験始めました。 マウスの糞便を使ってIgAをELISAで測定する時に使用するプロテアーゼインヒビターは何処の会社の物を使えば良いでしょうか？またプロテアーゼインヒビターを使わない場合は測定で不可なのか、教えて下さい。初めてELISA をすることになり、わからないことだらけです。

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