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(無題) 削除/引用 No.9458-11 - 2021/02/01 (月) 11:24:07 - TS 腸管の上皮は培養はかなり難しいですよ。 分離した直後に実験に使うとかは可能と思いますが、 基本的に培養は無理と思った方が良いと思います。 たぶん培養法を確立するだけ論文が書けるレベルです。 それが難しいので、オルガノイドが流行っています（もちろんオルガノイドにはほかの用途もありますが）。 たまーにオーバーナイトのカルチャーとかをしている論文を見かけますが、培養後は全死しているんだろうなと思って読んでいます。

(無題) 削除/引用 No.9458-10 - 2021/01/30 (土) 21:45:43 - f F= M x c 2

(無題) 削除/引用 No.9458-9 - 2021/01/30 (土) 10:49:03 - g もっと様 液量は考えもしたことがなかったです。 5mlでも15mlでも細胞にかかるgは一緒だと思っていました... おお様 200gでだいぶ死細胞を減らすことができました。 今日ラボに行って、細胞が接着しているかどうか、確認してきます。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.9458-8 - 2021/01/30 (土) 09:39:25 - おお すいません。いろいろプロトコールを見返してみるとやはりgはできるだけ小さくしているものが多いです。５０g、１００g、２００gとかなり低速でやっているものが多いです。 曖昧な記憶で適当なことを書いてしまってました。お詫びします。

(無題) 削除/引用 No.9458-7 - 2021/01/30 (土) 06:08:59 - もっと gだけでなく、遠心する際の液量や、時間、前後の温度変化にも注意を。 液量のイメージは、細胞の上から、押しつけて、押し潰そうとするものの 重さ。

(無題) 削除/引用 No.9458-6 - 2021/01/29 (金) 21:32:18 - g TS様 組織は空腸になります。 5 mM EDTAだけで剥離させています。 この細胞をプレートにまいてもみましたが、コラーゲン1やマトリゲルコートした表面にも全く接着せず死滅してしまいました。培養は難しいでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.9458-5 - 2021/01/29 (金) 18:45:07 - TS 結局、どこの上皮なんでしょう。遠心の強度に関係なく、高い生細胞率で分離が難しい上皮もありますよ。

(無題) 削除/引用 No.9458-4 - 2021/01/29 (金) 13:38:51 - g おお様、toto様、ありがとうございます。 500gはちと強すぎる、という感覚的なことを聞けてとても嬉しいです。 はい、300や150gでどうなるか、みてみます。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.9458-3 - 2021/01/29 (金) 11:48:30 - toto あくまで一般的な話ですが、細胞の遠心で500ｘｇはちょっと強すぎる感じはします。この加速度では細胞はきれいにパックされますよね。プロトコールがあるのでしょうが、遠心による選別が目的でないのならば、落ちればいいわけなので、極力少なめにしたほうがviabilityはあがると思います。特に単離後の細胞は物理的に弱くなりがちです。遠心条件を振ってみることをお勧めします。なお、処理の条件でも影響受けるのでそちらも要注意です。

(無題) 削除/引用 No.9458-2 - 2021/01/29 (金) 07:54:24 - おお ５００gでも３００gでも大きな違いを生じないと思います。その他の操作などもチェックしてみてください。 どの組織からどんな細胞を取ろうとしているのか、その手順はどうなのかを書いたほうがアドバイスが得られやすいでしょう（開示してもいいと思うなら）。

マウスの上皮細胞の遠心 削除/引用 No.9458-1 - 2021/01/29 (金) 02:45:27 - g いつも勉強させてもらっています。 マウスの組織を消化し、その後、遠心して細胞を回収していますが、死細胞の割合が多いです。 細胞は低吸着の15mlチューブにFBS入りの培地で消化した細胞を入れ、500g、5分、4度で行なっていますが、500gは強すぎでしょうか？300gでも十分でしょうか？ 初歩的な質問で申し訳ないですがお願いします。

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