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(無題) 削除/引用 No.9491-3 - 2021/02/09 (火) 09:54:56 - モルカーいいよね ありがとうございます、抗体を全て新規購入するのでそこそこ予算を喰うためご意見聞きたかった次第です（まあ抗体自体がワークするかも確かめなきゃいけないので結局やってみるしかないのですが。。。） ＞抗体認識部位は、もっと離れた組み合わせにする 有名どころで売っていたのが上記組み合わせだったのですが、もう一度離れた組み合わせがないか探してみます ＞抗原をビオチン標識して、競合法にする 本手法は全く経験がなかったので検討していませんでした、アイディアありがとうございます

(無題) 削除/引用 No.9491-2 - 2021/02/09 (火) 05:56:33 - やってみなはれ まずはやってみなはれ。 サンドイッチの場合、抗体認識部位は、 もっと離れた組み合わせにすることが 多いけど、そうも言ってられないときも ありえる。 二つの抗体のどちらかを固層するかは、 両パターン試して見て、安い方、沢山入手しやすい方を 固層に使う。ランニングコスト節約のため。 第二抗体を固層することもありえる。書いた例なら、 抗マウス抗体を固層。 ただし、サンドイッチよりも、抗原をビオチン標識して、 競合法にする方が、安上がりだし、ルーティンワークに なった時も楽。

サンドイッチELISAの抗体選択 削除/引用 No.9491-1 - 2021/02/08 (月) 19:12:48 - モルカーいいよね 現在サンドイッチELISAのメソッドを検討中です。 この際の固相化抗体、検出用抗体の選定についてご意見を伺いたく存じます。 約50kDaの翻訳後修飾された抗原を検出する際に ・固相化抗体：目的タンパク質aa1-40の翻訳後修飾サイトを免疫源としたマウスモノクロ抗体 ・検出用抗体：目的タンパク質aa29-192を免疫原としたウサギポリクローナル抗体 ・二次抗体：HRP標識抗ウサギIgG抗体 という組み合わせで行こうかと思うのですが、これで問題ないでしょうか。固相化抗体と検出用抗体で一部エピトープ部位が重なっているのが気になっています。

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