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(無題) 削除/引用 No.9507-4 - 2021/02/14 (日) 19:36:56 - Iriiro それから、プレートの洗浄も強くした方がよい 場合によっては、5回以上で、洗浄液を入れてボルテックス 。

(無題) 削除/引用 No.9507-3 - 2021/02/14 (日) 19:35:14 - Iriiro ブロッキング剤も、BSAや、ポリマー液とか色々ある。 それから、マイクロプレートの選択も注意した方がいい。 それぞれのメーカーに聞いた方がよい。 抗原とか、キットとか、抗体とかの情報の開示が無ければ、 これ以上のアドバイスは難しい。

(無題) 削除/引用 No.9507-2 - 2021/02/14 (日) 18:48:22 - おお いやいや、抗体によって感度も変わるだろうから、ポジコンでどれくらいの量入れてるか知らんけど、それがどうして吸光度を1.2~1.4にならないといけないのか。 wellの吸光度を1.2でバックグランドが0.7と言うことは、実質のシグナルは0.５ほど、抗体の濃度を上げた割には効果がないということではないのか？

ELISAのブロッキング剤 削除/引用 No.9507-1 - 2021/02/14 (日) 17:18:15 - hiro いつも勉強させていただいています。ELISAを行っていますがなかなかうまくいきません。抗原をwellの底に固相化→ブロッキング(1hr)→1次抗体反応(PBS-T, 1hr)→2次抗体HRP反応(PBS-T, 1hr)→TMBで発色→H2SO4で停止、という流れで行っています。抗体の濃度を調整して、ポジコンのwellの吸光度を1.2~1.4まで高めるとブランクの吸光度が0.7程度まで上がってしまいます。 逆に抗体濃度を低めにして丹念に洗浄してブランクの吸光度を0.1前後まで下げるとポジコンの吸光度は0.3程度までしか上がらない、という状態です。 kitに付属のBlocking Buffer(組成不明)を使用しているのですが、ブロッキングが不十分なのではないか？と考えています。 比較的強力にブロッキングしたいときに使用するブロッキング剤はどのようなものがありますでしょうか？ また、ポジコンの吸光度を高め、ブランクの吸光度を下げる方法について他に試すこと等ありましたら、ご教示いただけますでしょうか？

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