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パラフィン切片の免疫染色用のEGFP抗体 トピック削除
No.9545-TOPIC - 2021/02/28 (日) 02:19:59 - Chi-san
パラフィンフィン切片で、微量に発現するEGFPを検出できる抗体を探しています。過剰発現時に検出できる抗体はすぐ見つかるのですが、顕微鏡で蛍光をぎりぎり見ることができるような発現でも検出できるような抗体がなかなかみつかりません。感度の良いEGFP抗体をご存知の方教えていただけないでしょうか?どうぞよろしくお願い致します。
 
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No.9545-6 - 2021/02/28 (日) 20:23:24 - おお
ちなみにポリクロとモノクロどちらが都合良いのでしょうか。むかしRocheが2つのモノクロを混合した商品を売ってたけど、その抗体がいいかはわからないけど、特異性がしっかりとした抗体なら認識するエピトープが違うものを混ぜるといくらか強くなるんじゃないと感覚的に思ったりもします。相加的なのですごい改善が見られるとは言えないかもしれないけど。

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No.9545-5 - 2021/02/28 (日) 20:10:20 - おお
もともと弱いということですね。抗体の感度、良し悪しはあまり情報を持ってませんが、以下のようなシグナル増強は可能かと思います。

https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-analysis/cellular-imaging/immunofluorescence/tyramide-signal-amplification-tsa.html

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No.9545-4 - 2021/02/28 (日) 19:38:53 - Chi-san
細胞移植実験を行っており、移植した細胞をEGFPでラベルしています。切片では蛍光はみえませんが、固定前のサンプルでは弱く蛍光が検出できます。

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No.9545-3 - 2021/02/28 (日) 10:45:54 - AA
EGFP自体の蛍光が見れるなら大抵の交代で検出できると思います。
むしろ問題はパラフィン化の過程で変性した蛋白を認識できるかどうか、で
例えば私の経験では、MBLの抗GFP抗体は非常に感度が良いですが熱がかかってると途端に検出が悪くなります。

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No.9545-2 - 2021/02/28 (日) 04:37:19 - おお
パラフィン切片で弱い蛍光が見られるなら実際は結構発現している可能性がありますが、、、

どのような実験デザインなのでしょうか。

パラフィン切片の免疫染色用のEGFP抗体 削除/引用
No.9545-1 - 2021/02/28 (日) 02:19:59 - Chi-san
パラフィンフィン切片で、微量に発現するEGFPを検出できる抗体を探しています。過剰発現時に検出できる抗体はすぐ見つかるのですが、顕微鏡で蛍光をぎりぎり見ることができるような発現でも検出できるような抗体がなかなかみつかりません。感度の良いEGFP抗体をご存知の方教えていただけないでしょうか?どうぞよろしくお願い致します。

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