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FACS 細胞周期解析: DAPI/Brduの方法について トピック削除
No.9551-TOPIC - 2021/03/03 (水) 13:11:34 - Tanaka
皆様お世話になっております。現在Brduによる細胞周期解析は行なっているのですが、よく論文にある様なDAPIとの併用時はどの様に染色すれば良いのでしょうか?(特にEtOH固定はしているのか、DNAaseとDAPI染色の順番など)調べても中々わからず質問させて頂きました。
 
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No.9551-5 - 2021/03/04 (木) 09:23:42 - ど素人
EdUでも最後に全 DNA 染色をするとしている例がありました。

https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/references/protocols/cell-and-tissue-analysis/flow-cytometry-protocol/cell-proliferation/standard-click-it-edu-flow-cytometry-cell-proliferation-assay.html

また、細胞内染色はパラフォルムアルデヒド固定後Triton-X 100 などで孔を開けるという形のものが多いようです。一方でエタノールを使う例というのもあるようです。

https://www.biolegend.com/ja-jp/protocols/anti-brdu-staining-using-70-ethanol-and-2n-hcl

(無題) 削除/引用
No.9551-4 - 2021/03/04 (木) 06:55:56 - おお
https://www.biolegend.com/en-us/protocols/anti-brdu-staining-using-dnase-with-surface-and-fluorescent-proteins

最後になってますね。

(無題) 削除/引用
No.9551-3 - 2021/03/03 (水) 15:34:37 - s
ちょっと質問とはずれますが、EdUは使わないのですか。BrdUに比べてすごく楽だと思いますが。

(無題) 削除/引用
No.9551-2 - 2021/03/03 (水) 14:50:14 - ど素人
私は BrdU の標識をやったことがありませんが、
以下などが参考になるように思います。

https://www.bdj.co.jp/pdf/64-035-01.pdf

FACS 細胞周期解析: DAPI/Brduの方法について 削除/引用
No.9551-1 - 2021/03/03 (水) 13:11:34 - Tanaka
皆様お世話になっております。現在Brduによる細胞周期解析は行なっているのですが、よく論文にある様なDAPIとの併用時はどの様に染色すれば良いのでしょうか?(特にEtOH固定はしているのか、DNAaseとDAPI染色の順番など)調べても中々わからず質問させて頂きました。

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