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(無題) 削除/引用 No.9567-4 - 2021/03/09 (火) 16:57:32 - G25 PFA固定で十分。 ただし、通常の組織標本より一層、組織全体が遅滞なく速やかに固定されるように留意するべきでしょう。新鮮組織の凍結切片なら速やかに凍結して、切片にしてから適切に固定。 PFA固定されてからは内在性のRNaseに配慮する必要性はまったくない。また、外因性でもRNaseは言われているほど組織標本内のRNAにダメージは与えない、というのが私の所感。以前、意図的にRNase処理を加えた標本を、陰性対照にすべくサイドバイサイドでやったけど、無処理との違いはなかなか出なかった。 ましてや、常識的に清潔な実験環境で作業していて、意図せず汚染するくらいのレベルのRNaseが結果を左右するような重大なダメージを与えるとは考えにくい、と私は思っている。

(無題) 削除/引用 No.9567-2 - 2021/03/09 (火) 14:45:47 - seventh 大抵PFA等による固定（とタンパク質変性）のステップがあるのでは。

ISHの際のRNase失活化 削除/引用 No.9567-1 - 2021/03/09 (火) 14:28:08 - Toss 現在，ISHを行っており，RNaseのコンタミに最大限に気を遣うようにしています。 その過程で，疑問に思ったのですがどんなに実験者が気を付けても生体には内在性RNaseが存在するため，どこかで失活化を行うべきなのでは？と思っています。 一般的なRNA抽出だけならRNase Inhibitorを入れればいいと思うのですが，ISHに使う場合はどう対処していますか？ 私は摘出臓器を凍結包埋（急冷でRNaseが失活化するともありますが）や，そのままWhole-mount ISHで扱うこともあります。皆さんのお知恵を拝借させてください。

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