Bio Technical フォーラム

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トランスフェクションで用いる293T細胞に関して トピック削除
No.9903-TOPIC - 2021/09/10 (金) 13:31:14 - s
現在293TでsgRNAを含んだウイルスを作って、これを293細胞に感染させてKOさせようとしています。

そこで質問なのですが、まず293Tを培養して、そこにpLKOやpCAG-HIVsp、pCMV-VSVG-RSV-rev、PEI-Maxを加えてウイルスを作らせると、ディッシュのある一部に円形に細胞がない部分ができることがあるのですが、

これは何か意味がある現象なのでしょうか?

研究室の方も同様にディッシュに満ぱんにある細胞の2か所くらいが穴が開いたようになっているのですが、理由が分かる方がおられたらご教示頂きたいです。
 
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(無題) 削除/引用
No.9903-3 - 2021/09/23 (木) 19:03:06 - た
おそらく勢いよく試薬を加えたため、その部分が剥がれたのだと思います。

(無題) 削除/引用
No.9903-2 - 2021/09/23 (木) 08:51:17 - おお
トランスフェクションに若干毒性があるのかもしれませんね。その293Tはウイルスを作るだけなのでちゃんとウイルス産生されているなら、まあいいのかもしれません。

毒性の原因としてはDNA精製で混入したもの(LPSとか)、PEI-Maxが若干多すぎるとかいうのが原因のような気がします。

トランスフェクションで用いる293T細胞に関して 削除/引用
No.9903-1 - 2021/09/10 (金) 13:31:14 - s
現在293TでsgRNAを含んだウイルスを作って、これを293細胞に感染させてKOさせようとしています。

そこで質問なのですが、まず293Tを培養して、そこにpLKOやpCAG-HIVsp、pCMV-VSVG-RSV-rev、PEI-Maxを加えてウイルスを作らせると、ディッシュのある一部に円形に細胞がない部分ができることがあるのですが、

これは何か意味がある現象なのでしょうか?

研究室の方も同様にディッシュに満ぱんにある細胞の2か所くらいが穴が開いたようになっているのですが、理由が分かる方がおられたらご教示頂きたいです。

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