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(無題) 削除/引用 No.10562-7 - 2022/06/22 (水) 10:27:13 - ぷう 刺激強度と相関性はなく、検量線は引けています…

(無題) 削除/引用 No.10562-6 - 2022/06/21 (火) 20:42:58 - おお その刺激強度（濃度）と相関性がありますか。？ あるなら、やはり刺激で発現が変わっているか、場合によってはRt効率が変わっているか。状況によっては細胞が瀕死で細胞内ですでにRNAの分解が進んでいるのかも。

(無題) 削除/引用 No.10562-5 - 2022/06/21 (火) 15:53:25 - seventh 検量線がきちんと書けない条件ではddCT法は適用できません。

(無題) 削除/引用 No.10562-4 - 2022/06/21 (火) 13:02:48 - q RTからやり直してみるか、ハウスキーピング遺伝子変えてみたら？

(無題) 削除/引用 No.10562-3 - 2022/06/21 (火) 12:23:13 - ぷう 1回の実験の中で、サンプルのハウスキーピング遺伝子のぶれが大きいです… どの濃度の刺激でも同じような値が出て欲しいのですが、刺激濃度によって全然違う値がでます… 後、ΔΔ法で解析した結果と検量線法で解析した結果が全然異なるのですがそういうものなのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.10562-2 - 2022/06/20 (月) 23:21:13 - おお ぶれが大きいというのは、TestとControlで違うということなのか、毎回の実験で数字が違うということなのか、、、、 それはともかく、dCTを使うなら発現を見たい対象のほうはブレないのですか？ ピペッティングのエラーなどは自身で点検して改善することが望まれますが、たとえばチューブに何回かピペッティングで水を入れていき重量を測れば正確さをラフに見積もることができます。Ct値で１変わるとなると２倍のブレになるのでピペッティングにしては相当ひどい（非常に少ないボリュームならあるのかもしれませんが、それなら誤差が抑えられるように少し取るボリュームを増やしてもいいのかも）と思います。 あとできることとしては、ハウスキーピングと興味ある遺伝子のPCR反応溶液を１つのチューブでつくり、それを２つに分けてプライマーなどを加えると、ほぼ一緒の量のサンプルが入った反応溶液が作れるので、dCTを取ったときに誤差がかなり解消されると思いますがどうでしょうか。 あとRNAを取ってくるまでのサンプル調製時になにか起きている可能性は否定できますか？

qPCR　ハウスキーピング遺伝子　ぶれ 削除/引用 No.10562-1 - 2022/06/20 (月) 14:53:35 - ぷう qPCR初心者です。 qPCRのハウスキーピング遺伝子のぶれが大きすぎて困っています。 他のいくつかの論文を拝見したところ、ハウスキーピング遺伝子の選択が誤っているとは考えにくい状態です。 考えられる可能性として、ピペッティングエラー、逆転写効率の違い、などのほか何がありますでしょうか。

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