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マウスリンパ球の免疫染色 トピック削除
No.506-TOPIC - 2012/05/10 (木) 23:29:19 - satoshi
3年目の大学院生です.
ヒトとマウスの腫瘍などを,主にダコのエンビジョンキットやニチレイのシンプルステインキットなどを用いて,免疫染色した経験があります.

今回マウスのCD4, CD8リンパ球を染色したいのですが,ほとんど反応が見られず非常に困っています.
標本はマウスの脾臓と皮下腫瘍(colon26)で,ホルマリン固定のパラフィン切片しかない状況です.いろんな方にお聞きして,凍結標本や亜鉛固定であれば確実に染まることはわかったのですが,実験の制限からホルマリン固定しか無く,追加のサンプルはとれない状況です.
以前にラボの先輩が,同じくホルマリン固定のパラフィン切片で,CD4, CD8ともに染められたことがあるのですが,使用した抗体は現在発売されておらず,その他の詳細もわかりません.

マウスのホルマリン固定のパラフィン切片で,リンパ球を染色されたことがある方がおられましたら,ぜひアドバイスをいただきたいです.
どうぞよろしくお願いします.
 
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(無題) 削除/引用
No.506-11 - 2012/09/01 (土) 14:05:57 - おお
Some suggestions here

http://www.abcam.com/CD8-antibody-ab4055-support.html

Unconjugated anti-CD4 that targets rat, mouse and pig produced in that same animal:

Ab61131; Rabbit polyclonal; predicted but not tested in Pig, Mouse, Rat based on sequence homology


Or

ab125711; Mouse monoclonal;predicted in pig; not yet tested in mouse





Unconjugated anti-CD8 that targets rat, mouse and pig produced in that same animal:

Ab4055; Rabbit polyclonal, predicted but not tested in Pig, Mouse, Rat based on sequence homology



Or

Ab17147; Mouse monoclonal, not yet tested in Mouse, Rat or Pig. I do not that the exact immunogen however the C-terminal end is well conserved in each species as such we predict this product may work in these species

(無題) 削除/引用
No.506-10 - 2012/09/01 (土) 13:56:42 - おお
あ、しつれい。マウスの反応性は分からないやつばかりですね。

(無題) 削除/引用
No.506-9 - 2012/09/01 (土) 13:52:14 - おお
http://www.abcam.com/CD8-antibody-ab85792.html
http://www.abcam.com/CD8-antibody-none-given-ab87951.html

ほら

(無題) 削除/引用
No.506-8 - 2012/09/01 (土) 13:49:54 - おお
http://www.abcam.com/CD8-antibody-ab4055.html
http://www.abcam.com/CD8-antibody-144B-ab17147.html

(無題) 削除/引用
No.506-7 - 2012/09/01 (土) 13:39:53 - おお
http://www.abcam.com/CD4-antibody-BC-1F6-ab846.html

Immunohistochemistry (Formalin/PFA-fixed paraffin-embedded sections) - CD4 antibody [BC/1F6] (ab846)

さがせばあるんじゃないかなぁ

検索方法 削除/引用
No.506-6 - 2012/09/01 (土) 08:47:35 - けんぞう
Biocompareで検索すると様々な種類の抗体がでてきますよ。

(無題) 削除/引用
No.506-5 - 2012/05/11 (金) 08:33:01 - satoshi
Qさんへ
コメントありがとうございます

それについても調べていますが,先ほど書き込んだ先輩の論文があるのと,その他に見つかったものはいずれも凍結切片を用いています.
結局は凍結切片があればよかったのですが,サンプルが小さくそこまで余裕がなかったことと,そこまで凍結切片を重要視していなかったことがあります.
追加実験ができないので,今あるホルマリン固定のサンプルで染色したいのです.

(無題) 削除/引用
No.506-4 - 2012/05/11 (金) 08:07:31 - Q
同じようなことをやってえる論文を検索、検索。

(無題) 削除/引用
No.506-3 - 2012/05/11 (金) 00:07:27 - satoshi
Paさん
お返事ありがとうございます

使えそうな抗体はかなり調べたのですが,まずマウスのパラフィン切片の免疫染色に使用できるCD4, CD8抗体が非常に少なかったです.パラフィン切片での免疫染色は適応から外しましたと記載されているものもいくつかありました.
そのうち,パラフィン切片での免疫染色が可能とされていたいくつかの抗体を,データベースに記載されたように使用したのですが,うまくいきませんでした.賦活化処理をオートクレーブで行ったりも試しましたが,反応がないか,同時にバックグランドが強く出現して判別できないなどという結果です.

恥ずかしながら知らなかったのですが,パラフィン切片というとホルマリン固定と思い込んでいましたところ,亜鉛固定のことがあるのですね.
あらためてパラフィン切片,ホルマリン固定で検索してみても抗体がみつからず,いよいよ困って,こちらに尋ねさせてもらいました.抗体などご存知でしたら教えていただければ非常に助かります.

(無題) 削除/引用
No.506-2 - 2012/05/10 (木) 23:39:11 - Pa
まずはどの抗体が使えそうか調べましょう。
そして、その抗体のデータシートに書いてある処理の仕方で切片を処理しましょう。

マウスリンパ球の免疫染色 削除/引用
No.506-1 - 2012/05/10 (木) 23:29:19 - satoshi
3年目の大学院生です.
ヒトとマウスの腫瘍などを,主にダコのエンビジョンキットやニチレイのシンプルステインキットなどを用いて,免疫染色した経験があります.

今回マウスのCD4, CD8リンパ球を染色したいのですが,ほとんど反応が見られず非常に困っています.
標本はマウスの脾臓と皮下腫瘍(colon26)で,ホルマリン固定のパラフィン切片しかない状況です.いろんな方にお聞きして,凍結標本や亜鉛固定であれば確実に染まることはわかったのですが,実験の制限からホルマリン固定しか無く,追加のサンプルはとれない状況です.
以前にラボの先輩が,同じくホルマリン固定のパラフィン切片で,CD4, CD8ともに染められたことがあるのですが,使用した抗体は現在発売されておらず,その他の詳細もわかりません.

マウスのホルマリン固定のパラフィン切片で,リンパ球を染色されたことがある方がおられましたら,ぜひアドバイスをいただきたいです.
どうぞよろしくお願いします.

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