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(無題) 削除/引用 No.5329-12 - 2019/11/06 (水) 12:44:09 - つん （汚染防止のために）アルミホイルやラップの上にキムタオルを数枚のせ、デカンタで捨てる。ELISAのときにやるような感じです。 プレートをゆっくりひっくり返すとウェル間で培地のコンタミがおこりそうなので、すばやくひっくり返します。 その後、強い接着細胞なら、きれいなキムタオルの上にかるくたたきつけると水分をしっかり取り除けます。 弱い接着細胞の場合は、きれいなキムタオルの上に2−3秒逆さまに置いて水分を吸わせます。

96well plateを傾けてから吸引するのはいかがでしょうか。 削除/引用 No.5329-11 - 2019/11/05 (火) 18:19:36 - 猫弁当 私も同じことに悩みました。 どちらかというと吸った側ではなくなぜか中心が少なくなってしまいました。 96well plateを傾けて培地を偏らせた状態で吸引すると細胞の吸引というか、密度の低下が少なくなりました。 理由はまだわかりません。 お役に立てますと幸いです。

(無題) 削除/引用 No.5329-10 - 2016/08/19 (金) 00:44:45 - おお 完全に培地をreplaceしなくていいなら、必要な試薬が入った培地を更に加えるだけでもいいかもしれません。アスピレーターで吸う事自体必要なくなるので。

(無題) 削除/引用 No.5329-9 - 2016/08/18 (木) 19:48:48 - あい ご返答ありがとうございます。 この培地交換は、MTT試薬を入れる時ではなく、 前培養後の刺激時に行ってます。 また、扱ってるのは、接着細胞です。 剥がれかけの細胞は、見えておらず、 どちらかというとアスピレーターを入れた側の細胞密度が低いという現象です。 皆様のご意見を参考にして、 いろいろ試してみたいと思います。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.5329-8 - 2016/08/17 (水) 15:38:32 - おお アスピレーターですわないで、12連とか８連のピペット使えばいいんじゃないかな。そうすればたとえば乾いたりギリギリまで吸って必要なものまで吸うのを避けるために２００マイクロあるところから１８０マイクロすうとかできるし、ウェル間で残った培地の量が大きくバラツこともないだろうし（もちろん手技ややりかたによりますけど）。 剥がれやすい細胞もあるので、他の細胞の経験から大丈夫な方法でも剥がれるとかあると思いますが、なるべくそっと吸うのがいいとしか言いようがないです。反応後顕微鏡で剥がれかけの細胞がないか見てますか？

(無題) 削除/引用 No.5329-7 - 2016/08/17 (水) 13:54:09 - 123 浮遊細胞ならWST-1 assayにした方がいいのでは。 付着細胞が細胞死んではがれているなら、付着している細胞の活性を見ればいいのでは。

(無題) 削除/引用 No.5329-6 - 2016/08/16 (火) 01:55:33 - しろ アスピレーターの強さを弱めたり、先にチップとつけて吸い上げたりといろいろと試したことがありますが、一番いいのはwsでfrtgyふじこlpさんのおっしゃるように手動での吸い上げでした。100マイクロずつ入れていた場合、ピペットを120とかにセットしてプレートを傾けてそっと吸い上げて15ミリか50ミリのチューブにどんどん入れていました。全ウエル一度にやると最初にとった場所が乾くのもいやなので、1列か2列とって培地を入れ、次の1，2列とって培地を入れ・・・とやっていきます。ウエル間の測定誤差はだいぶ小さくなりますよ。

(無題) 削除/引用 No.5329-5 - 2016/08/15 (月) 22:35:33 - tracker アスピレーターの先につけているのは何ですか？ パスツールとかならイエローチップやP2チップにするとわりかしマイルドに吸ってくれるようになります。 96wellで剥がれやすい細胞ならP2チップが良いですね。1mlのディスポピペットの先端側にP2チップ、綿側は折ってアスピレータのシリコンチューブにつけます。

(無題) 削除/引用 No.5329-4 - 2016/08/15 (月) 05:44:12 - wsでfrtgyふじこlp 楽しないで、μピペットで１wellづつ吸う。 この培地吸うのってMMT試薬いれたあとの話だよね。

(無題) 削除/引用 No.5329-3 - 2016/08/15 (月) 04:33:54 - おお ん、あれ、これ、おれ？

(無題) 削除/引用 No.5329-2 - 2016/08/15 (月) 02:06:36 - おお MTT原液を培養後の培地にそのままダイレクトに加えてます。もんだいないですよ、きちんとバックグラウンドを引けば。

アスピレーターで細胞を吸わないコツ 削除/引用 No.5329-1 - 2016/08/15 (月) 01:33:56 - あい 96ウェルプレートの細胞をアスピレーターで吸うとき、吸った側の細胞がいなくなります。 MTTで、これが影響してとても困っています。 培養液をの少し残すようにして吸うのも一つの手だと思うのですが、 残った培養液の量が一定でないと、 吸光度に影響があるのでは？と考えてしまいます。 何かコツみたいなのがあれば教えてほしいです。

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