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ブロッキング後のメンブレンについて トピック削除
No.5750-TOPIC - 2017/02/10 (金) 06:04:55 - B4
こんにちは。
ウェスタンブロッティングの時に、BSAでブロッキングしたニトロセルロース膜を4度で保存して、後日一次抗体処理することは可能なのでしょうか?
 
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No.5750-6 - 2017/02/10 (金) 19:41:43 - 774R
ブロッキングを4℃、over nightでやっても特に気になったことはないですね。
2日以上放置で腐敗が心配な時はアザイド入れてます。

経験上、1次抗体は4℃、over nightがS/Nが良い印象です。
over nightがルーチンになってますが、たまに急いでいるときに時に室温数時間でやるとシグナルが弱く感じることが多いです。

抗体の種類だけでなく、ブロキング剤やメンブレンの違いでも結果は違ってくるのかもしれませんが・・・

(無題) 削除/引用
No.5750-5 - 2017/02/10 (金) 16:51:33 - Himajin
2、3日くらいなら置いといても特に問題なしです。
個人的な経験では、1週間くらい置いておくと明らかにシグナルが弱くなりました。

保存は効きます 削除/引用
No.5750-4 - 2017/02/10 (金) 14:10:05 - いんせーい
ブロッキング剤をから取り出して(腐敗防止),乾燥に注意すれば大丈夫です。
翌日実験する流れにしたければ,一次抗体反応を4℃,overnightでもいいと思います(抗体濃度の至適化は必要だと思いますが)。

(無題) 削除/引用
No.5750-3 - 2017/02/10 (金) 09:47:50 - おお
できなくはないと思います。ブロッキングバッファーのなかで長期おいておくとブロッキング過剰になるという懸念はあります。検出しにくくなったという経験は一応あります(100%ブロッキング過剰なのか検証しておりませんけど)。

(無題) 削除/引用
No.5750-2 - 2017/02/10 (金) 08:32:43 - name
何かダメだと思う理由を思いつきますか?

ブロッキング後のメンブレンについて 削除/引用
No.5750-1 - 2017/02/10 (金) 06:04:55 - B4
こんにちは。
ウェスタンブロッティングの時に、BSAでブロッキングしたニトロセルロース膜を4度で保存して、後日一次抗体処理することは可能なのでしょうか?

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