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(無題) 削除/引用 No.5910-11 - 2017/04/17 (月) 11:46:45 - タグっち ないないｗ

(無題) 削除/引用 No.5910-10 - 2017/04/16 (日) 20:35:48 - うーん ないね

(無題) 削除/引用 No.5910-9 - 2017/04/16 (日) 11:06:01 - おお Fc receptorとか抗体に結合するような蛋白がしっかりと発現していたらもしかしたら２次抗体だけでシグナルが出る可能性はあると思います。組織だと血液など抗体がたくさんある部分を含んでいたらそれが異種であってもいくらかシグナルが出てしまうことがあるかもしれません。IPで異種の抗体を使っても最近の高感度のケミルミ試薬ではそれなりにシグナルが出てしまいます。

(無題) 削除/引用 No.5910-8 - 2017/04/16 (日) 08:57:40 - 小言幸兵衛 同じサンプル、同じ条件でウエスタンしたところ、freeze-thawを経ていない２次抗体では出ていなかった非特異的バンドが、freeze-thawしたものでは出るようになったということですか？それとも、他にもサンプルもしくは条件に違いがありますか？

(無題) 削除/引用 No.5910-7 - 2017/04/15 (土) 22:26:32 - ないない ないですね

(無題) 削除/引用 No.5910-6 - 2017/04/15 (土) 19:56:48 - O サンプルはなんですか？ 2次抗体の認識するimmunoglobulinの動物種とサンプルの由来動物種が同じあるは比較的近縁だと（マウスとラットみたいな）血液を含むようなサンプルの場合（動物組織など）残存する血液由来のimmunoglobulinと反応して50K付近や20K付近に強いバンドがでることはよくあります。高感度系なので、十分に血液を除去したつもりでもけっこう出ます。IPなどでも同様のことが起こります。いわゆるnon-specificというのとは意味合いがちょっとちがうけど。

(無題) 削除/引用 No.5910-5 - 2017/04/15 (土) 19:37:15 - なぞ 2次抗体のみを反応させたところ、非特異的なバンドが出てきました。 >[Re:3] おおさんは書きました : > 凍結融解でWork しなくなったという経験はないと思います。 > ＞抗体の特異性が著しく下がった > 特異性の問題だったのかHRPの活性の問題であったのかなどどの様に見極めたのでしょうか？非特異バンドが出てきたのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.5910-4 - 2017/04/15 (土) 16:15:20 - O 凍結状態で届く事は多いので、結局２回凍結融解になることはよくあるとおもいますが、幸い、それで抗体が失活したという経験はいまのところありませんし、周囲でも聞きません。もちろんケースバイケースなので、抗体によっては起こることもありえるとはおもいます。HRPも比較的タフな酵素なので大丈夫なような気がします。凍結保存する前からもともと変だったということのほうが可能性としてあるとおもいます。

(無題) 削除/引用 No.5910-3 - 2017/04/15 (土) 01:45:25 - おお 凍結融解でWork しなくなったという経験はないと思います。 ＞抗体の特異性が著しく下がった 特異性の問題だったのかHRPの活性の問題であったのかなどどの様に見極めたのでしょうか？非特異バンドが出てきたのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.5910-2 - 2017/04/14 (金) 22:38:59 - Nanashi_et_al ありません

抗体の保存 削除/引用 No.5910-1 - 2017/04/14 (金) 21:42:31 - なぞ はじめて質問させていただきます。 2次抗体を-80℃に保存しておき、久しぶりに解凍しました。 Freeze throwは分注した時と今回workingにしたときにのみなのですが、このようなことで抗体の特異性が著しく下がった経験はありますか?

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