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タンパクコートの細胞培養のコントロールについて トピック削除
No.6095-TOPIC - 2017/07/03 (月) 11:18:31 - u-ron
タンパクをデッシュ表面にコーティングして細胞培養を行う実験を行っているのですが、コントロールの設定についてお伺いしたく存じます。
我々の実験室で今回新たにタンパクコートによる実験をスタートするのですが、目的とするタンパク(ヒトの細胞外基質タンパク)と比較するためのコントロールをどう設定するかで困っております。
他の論文ではウシの血清アルブミンを用いているものが多いのですが、そもそもコントロールに他のタンパクのコートを行っておられるのか、またアルブミンを用いておられる先生がいらっしゃいましたらコートする際の濃度などをお聞かせいただけると幸いです。
現状とりあえず0.1W/V%でコートして実験しております。


宜しくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.6095-4 - 2017/07/04 (火) 12:55:38 - X
かなり昔、この手の実験(細胞接着後の形態変化観察)をやってました。哺乳動物細胞の培養用ディッシュは、何らかのコーティングがすでにされているものが多いので、実験に影響する可能性があれば、確認された方が良いかもしれません。その上で、ネガコンですが、私の場合はウシ血清アルブミンを使ってました。コートする際の濃度は、目的の細胞外基質をコートする濃度(W/V)に合わせてましたが、それに意味があるかは不明です。アルブミン自体に何らかの作用がある可能性や、混入している不純物(Fraction Vなどは、純度が100%という訳ではないので)の影響などもあり得るので、予想外の結果が得られた時などは、注意が必要かもしれません。

(無題) 削除/引用
No.6095-3 - 2017/07/03 (月) 13:32:35 - おお
コートなし、コートありの比較でも十分成り立つと思いますけどね、、、
何か代わりのものをコートした時それによって変化があるかもしれませんので、、、

(無題) 削除/引用
No.6095-2 - 2017/07/03 (月) 12:01:12 - mon
ご指摘の目的でコーティング実験したことはありませんが、参考になれば。
BSAはデッシュ表面への(細胞?の)非特異的吸着を阻害する目的で、Negative Controlとなり得ます。
目的タンパクが細胞内へシグナルを伝えるのであれば、コラーゲンやファイブロネクチン・Matrigelが入手しやすいPositive Controlとなるかも。
以下のサイトも参考になるかも。。
https://www.corning.com/jp/jp/products/life-sciences/products/surfaces/ecm-resources.html

タンパクコートの細胞培養のコントロールについて 削除/引用
No.6095-1 - 2017/07/03 (月) 11:18:31 - u-ron
タンパクをデッシュ表面にコーティングして細胞培養を行う実験を行っているのですが、コントロールの設定についてお伺いしたく存じます。
我々の実験室で今回新たにタンパクコートによる実験をスタートするのですが、目的とするタンパク(ヒトの細胞外基質タンパク)と比較するためのコントロールをどう設定するかで困っております。
他の論文ではウシの血清アルブミンを用いているものが多いのですが、そもそもコントロールに他のタンパクのコートを行っておられるのか、またアルブミンを用いておられる先生がいらっしゃいましたらコートする際の濃度などをお聞かせいただけると幸いです。
現状とりあえず0.1W/V%でコートして実験しております。


宜しくお願いします。

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