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過剰発現系でのスプライスバリアント選択 トピック削除
No.6192-TOPIC - 2017/08/07 (月) 20:31:31 - Fufufu
いつも勉強させて頂いております。
現在新規のTSG候補を同定しその機能解析をIn vitroで行っております。まずはsiRNAを用いてKnockdownによる表現型の解析が終わり、次にOverexpressionによる表現型の解析を行いたいと思っております。そこで、Overexpressionのプラスミドを購入しようと考えているのですが、同定した遺伝子には非常に多くのSplice variantが存在しており、そのどのVariantをOverexpressionさせるのが良いのか見当がつきません。あまり知られていない遺伝子で、過去にもそれぞれのVariantの機能を個々に検討された論文は見つけられませんでした。このような場合に、どのVariantを過剰発現させてみるのが良いかを選択するなにか良い基準はありますでしょうか?
 
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No.6192-4 - 2017/08/09 (水) 09:37:35 - mon
Splice variantといってもタンパクをコードする領域は同一なものも多いですよ。
そうであれば(kozak+)CDSのみベクターに組み込めば良い。
CDSにバリエーションがあるなら、おおさんのご指摘通り。

(無題) 削除/引用
No.6192-3 - 2017/08/08 (火) 02:40:47 - おお
Yeah, what is it, TSG?
Tumor suppressor gene?


まず、あなたの実験対象の細胞などでどのスプライシングアイソフォームが発現していて、どれがドミナントなのか見てみるといいでしょう。かなりドミナントな物があればそれをまず見てみるのがいいかと。そういうデーターも論文に載せるデーターに十分なりえます。Tumor suppressor geneであれば、癌化したものとそうでないものを比べてスプライシングパターンに違いがあれば、Tumor suppressor geneとして働いている可能性のあるスプライシングアイソフォームを推測できるでしょう。


またそれぞれのアイソフォームのアミノ酸配列からドメイン解析をして(結論が出るかどうかはおいておいて)活性、ターゲット蛋白との結合ドメインなどの有無、リン酸化などの修飾されるアミノ酸のが飛ばされるか、挿入されるかとかなどの推測をやると、どのアイソフォームを使うのがいいかとか、複数の種類で比べたらどうかとか、いろいろアイデアが出ると思います。そういう推測がある程度合理性があるなら、論文にするとき選んだ理由を明記できますし、レビューアーからのツッコミも避けれるでしょう。

(無題) 削除/引用
No.6192-2 - 2017/08/08 (火) 02:10:29 - I
I think it' better to clarify what is TSG.

過剰発現系でのスプライスバリアント選択 削除/引用
No.6192-1 - 2017/08/07 (月) 20:31:31 - Fufufu
いつも勉強させて頂いております。
現在新規のTSG候補を同定しその機能解析をIn vitroで行っております。まずはsiRNAを用いてKnockdownによる表現型の解析が終わり、次にOverexpressionによる表現型の解析を行いたいと思っております。そこで、Overexpressionのプラスミドを購入しようと考えているのですが、同定した遺伝子には非常に多くのSplice variantが存在しており、そのどのVariantをOverexpressionさせるのが良いのか見当がつきません。あまり知られていない遺伝子で、過去にもそれぞれのVariantの機能を個々に検討された論文は見つけられませんでした。このような場合に、どのVariantを過剰発現させてみるのが良いかを選択するなにか良い基準はありますでしょうか?

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