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mon様 削除/引用 No.6234-15 - 2017/08/23 (水) 15:55:17 - 心配症 コメントありがとうございます。 血清濃度を変えても接着性のがん細胞の多くは大丈夫なんですね。 勉強になりました。

(無題) 削除/引用 No.6234-14 - 2017/08/23 (水) 11:54:18 - mon 血清等の粘度の高い液体は、ピペットから吐き出すだけではピペット内部に残留するのでピペッティング（共洗い）が必須ですし。 さらにいうなら10%血清の方が普通で、500mL培地に55（55.5）mLの血清を加えます。 と言いつつ、接着性がん細胞なら（経費節約のため）DMEM/F12培地+4%FBSを多用しています（実験にもよりますが）。ほとんどのがん細胞はDMEM+10%FBSから馴化不要で増殖速度等も変わりません。

小言幸兵衞様 削除/引用 No.6234-13 - 2017/08/23 (水) 10:33:37 - 心配症 いえいえ、皆様のコメントで安心出来ました。 心配症なので、ついしつこく聞いてしまう癖があり、不快な思いをさせてしまい、失礼致しました。 不安は解消され、問題解決です。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.6234-12 - 2017/08/23 (水) 08:36:00 - 小言幸兵衛 指導者の方も含めてここでも複数の方が問題無いと言っているのですが、それでは不十分ですか？そもそも分注された血清の容量はどのくらい正確なのですか。

血清50mL入れた500mL培地、血清49.5mL入れた500mL培地どちらも使いますか？ 削除/引用 No.6234-11 - 2017/08/23 (水) 08:09:23 - 心配症 おはようございます。 皆さま、コメントありがとうございます。 結論として500mLの培地に50mLの血清を入れた培地も 、49.5mLの血清を入れた場合も使って問題ないと思っていいでしょうか。 指導してくれてる方も気にしないで使うと言ってます。 計算上も両者の血清濃度の違いは0.1%程度ですし… 皆様なら、お使いになりますか？ もしくは作り直しますか？

(無題) 削除/引用 No.6234-10 - 2017/08/23 (水) 05:17:43 - 心配症 おお様、同じく心配症様 コメントありがとうございます。 おお様 仰る通り、誤差の要因はたくさんありますね。 フタについた分を上手く取って培地に入れられなかったので、もったいないけどもう一度、新たに培地＋血清を作り直そうかと思っていましたが、それ以外にも誤差の要因はたくさんあるので作り直すのはやめようと思います。血清、高いですし。 同じく心配症様 50mLのチューブに分注してます。確かに冷凍すると体積が増えてフタにつきます。解凍後は一度かるく遠心してフタについた分を落とすようにしています。 今までコンタミは運良くしていません。

(無題) 削除/引用 No.6234-8 - 2017/08/23 (水) 00:40:06 - 同じく心配性 ところで、蓋に血清が残っていたということは、50ｍLチューブに50mLのFBSが入っていたということでしょうか？ チューブのメーカーにもよるでしょうけど、50ｍLチューブに50mLのFBSを入れたら、凍結した時に体積が増えてガッツリ蓋にFBSがつきませんか？ 「蓋につけるのはコンタミへの第一歩である」が最初に習ったラボの教えで、そこでは多くても45ｍLまでしか入れてませんでした。通常は25mLでそれを二本使うのが基本でした。 ここに書き込まれている皆様はどのようにされているのでしょうか？やっぱり50mLチューブに50mL入れて、それを一本使うのが普通だったりしますか？ 新しく来たラボではそうやっているのですが、私が神経質になっているのか、それが気持ち悪くてしょうがないです。ラボメンバーが「コンタミした、新しく細胞起こさなきゃ」と言っているのを何回か聞いていて、FBSのストックのやり方を変えようよ、と言うべきかなと考えているのですが。

(無題) 削除/引用 No.6234-7 - 2017/08/22 (火) 23:24:07 - おお >そんな培地のわずかな誤差より日々の継代の仕方の方が影響ありそうですね。 他にも影響する要因があるので、違いが検出されるには至らないでしょう。 まいた細胞の数はどれくらいの誤差がありますか？ 培地のロットは？ 血清のロットは？ インキュベーターの温度の変動の幅は？ CO2の変動の幅は？ 継代するのは前の継代から正確に７２時間ですか？毎回３日後に継代するとして。 ピペットで培地を吸ったときにどれくらい正確に取れてますか？ 培地を交換するとして、完全に培地を吸い取ったら細胞の周りに完全に水分がなくなりますよね。そんなことが可能ですか？毎回正確に２００ｕL残すとかできるのですか。 血清を50mLずつ分注していたというけど、分注したときの誤差はどれくらいですか？

qq様 削除/引用 No.6234-6 - 2017/08/22 (火) 22:25:18 - 心配症 確かにそうですね。 0.5%くらいは誤差があって当然ですね。 細胞ってその程度の誤差では増殖や分裂に影響がないと思っていいでしょうか。 そんな培地のわずかな誤差より日々の継代の仕方の方が影響ありそうですね。

(無題) 削除/引用 No.6234-5 - 2017/08/22 (火) 22:03:30 - qq 50mlをそのまま50mlとして計算したでしょうが、血清を50mlずつ分注するのは、無菌的に行うのですから、きっと0.5ml程度の誤差（かそれ以上）を含んでいるだろうとおもいます。 培地全量の500mlも、市販品であれ、自作であれ、0.5%程度の誤差は織り込み済みではないかなと思います。

qq様 削除/引用 No.6234-4 - 2017/08/22 (火) 20:21:24 - 心配症 アドバイスありがとうございます。 指導してくれている方には相談しました。 「そのくらいの量じゃ変わらない」といわれました。 qq様の仰るように計算してみました。 フタに残った血清を500μLと多めに見積もったとして、入れた血清濃度は9.0% 500mLの培地に正確に50mLの血清を入れた場合は血清濃度は９.1% 0.1%の違いなら誤差範囲ですよね。

(無題) 削除/引用 No.6234-2 - 2017/08/22 (火) 19:53:35 - qq 出来上がりの培地の組成がいくら変わるか計算してみてください。 それから、ご自身で判断されるのが良いと思います。 初心者とのことですから、指導者とも相談されるのが良いでしょう。 ＞フタに数μL(多く見積もっても500μL以下)の血清 この見積りは、50倍以上違うのですがなんと申し上げれば良いやら判りません。

培地に入れる血清の量 削除/引用 No.6234-1 - 2017/08/22 (火) 19:06:28 - 心配症 培養初心者です。 今日、500mLの培地に血清を50mL入れていたところ、血清を50mLずつ分注していたチューブのフタに数μL(多く見積もっても500μL以下)の血清が残っており、ピペットで吸って入れようとしたのですが、ピペットか縁にあたってしまったので、コンタミが怖くてフタに残っていた血清は培地に加えませんでした。 血清は培地に正確な量を入れないと細胞に影響が出ますか？ 初心者なので、どこまで正確にやったらいいのかわからないので、皆様はどのくらい血清の添加量を気にしているのか教えて下さい。 よろしくお願い致します。

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