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(無題) 削除/引用 No.6509-3 - 2017/12/06 (水) 10:48:24 - X 複数の一次抗体を混ぜて染色した事がなく、比較した経験はないですが、一種類ずつ順次染色する形でうまくいかなかった事が、自分の経験ではほとんどない（うまく行かない時は、単染色の時点でダメか、二次抗体の組み合わせの問題か、のいずれかでした）です。抗体の量が許すならば、一回試されてみてはどうでしょうか？　一次抗体の反応時間を室温１時間にできれば、一日でできますよ。 抗体量に限りがあり、どうしても一発で決めたい、という場合は、OPALのキットを使ってみる手もあると思います。感度が高いので、一次抗体の使用量を減らせますし、一次抗体のspeciesを気にする必要も無くなります。ただ、FFPE用のキットになっており、１カラー毎に加熱処理を繰り返すプロトコールなので、固定した培養細胞などの場合は使いにくいかもしれません。 http://www.perkinelmer.co.jp/resrch/tabid/1801/Default.aspx

(無題) 削除/引用 No.6509-2 - 2017/12/05 (火) 17:40:45 - 774R ちなみに、1次抗体はそれぞれ由来の種はなんですか？　（ウサギとかマウスとかヤギとか、etc）

二重免疫染色について 削除/引用 No.6509-1 - 2017/12/05 (火) 16:03:51 - かんかん お世話になってます。 二重免疫染色について教えていただきたいです。 当方、細胞核内受容体と細胞質内タンパクの二重免疫染色に苦戦しています。 状況としては単体の染色ではシグナルは確認できているのですが、共局在を観察しようとするとうまく染色されません。 どちらもシグナルが出なくなったり、片方しかシグナルが出なくなります。 染色の仕方は二種の一次抗体を混合し４℃でO/N、二次抗体を順番に反応させます。 多重染色の方法として一次抗体を混合しないで各種の染色を順番に行う方法もあると思います。 こちらの方法の方がシグナルが出やすい等の特徴はあるのでしょうか？ 残りの抗体の量に限りがあるため、試行回数を確保することが難しいです。 漠然とした質問ではありますが、皆様の知恵をできたら幸いです。 よろしくお願います。

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