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精製緩衝液の沈殿物の原因は・・・ トピック削除
No.6561-TOPIC - 2018/01/06 (土) 14:36:44 - agg
いつも参考にしています。

現在、異種発現酵素の精製をおこなっています。
精製にHistag精製をおこなっているのですが、緩衝液に沈殿物が生じてしまいます。
即時調整じゃないとだめなのでしょうか・・・。

以下組成(A)
25 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
5% グリセロール

イミダゾールを加えた(B)の緩衝液には沈殿物が出ません。
お力添えお願いします。
 
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No.6561-5 - 2018/01/06 (土) 16:25:45 - agg
>monさん、ありがとうございます。
菌の繁殖なら毎度調製しなくて済みそうですね。
カラムの都合上EDTAを加えることができないのでA/Cか保存温度を変えてやってみます。B bufferのイミダゾールは500 mMで入っているのでそのせいかも知れないですね。
すっきりしました。ありがとうございます!

(無題) 削除/引用
No.6561-4 - 2018/01/06 (土) 16:13:04 - mon
「新しいデュラン瓶」って滅菌していないのですよね。
濾過滅菌した液体でも未滅菌ボトルにいれれば、何か生えますよ。
EDTA等が入っていれば増殖抑制効果がありますけど。
イミダゾールを入れた方は、(どれくらいの濃度か不明ですが)浸透圧が高すぎて生えないのでしょう。0.5M NaCl(1 OsM)程度のなると酵母でも滅多に生えないようです。

(無題) 削除/引用
No.6561-3 - 2018/01/06 (土) 15:58:47 - agg
>おおさん、ありがとうございます。
緩衝液はニトロセルロース膜で吸引ろ過したものを新しいデュラン瓶、室温で保存しています。
前回もAの緩衝液だけ沈殿物が見られたので作り直していました。
何かが結晶化したのかと思い、温度をあげたのですが溶けなかったです。
結晶物ではないとすれば、菌のほうが可能性高そうですかね...?

(無題) 削除/引用
No.6561-2 - 2018/01/06 (土) 15:46:45 - おお
沈殿するような組成ではないですね。。。グリセロールが炭素源になりうるのでなんか生えたんじゃない?保存温度は?

精製緩衝液の沈殿物の原因は・・・ 削除/引用
No.6561-1 - 2018/01/06 (土) 14:36:44 - agg
いつも参考にしています。

現在、異種発現酵素の精製をおこなっています。
精製にHistag精製をおこなっているのですが、緩衝液に沈殿物が生じてしまいます。
即時調整じゃないとだめなのでしょうか・・・。

以下組成(A)
25 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
5% グリセロール

イミダゾールを加えた(B)の緩衝液には沈殿物が出ません。
お力添えお願いします。

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