Bio Technical フォーラム

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PFA固定後スライドの長期保存方法 トピック削除
No.6683-TOPIC - 2018/02/14 (水) 07:48:43 - トロント
いつも勉強させていただいております。
今回スライド上で固定した細胞の保存方法についてお知恵をいただきたく質問させていただきます。
接着細胞をスライド上で培養し、4%PFAで10分固定後にPBS洗浄、その後に保存をしたいのですが、どのように保存するのが最も抗原性維持に適切かご教示いただけないでしょうか。
以前働いていたラボでは自分で染色をしていたので、固定後同日に染色を行っていたのですが、現在のラボのテクニシャンは他人が抗体を使うことを許可してくれず染色してくれるのを待たなければいけません。
数日で染色してくれるならばPBSにいれて4℃保存でも染まると読んだことがあるのですが、1、2週間取り掛かってくれないことも多く、長期保存方法に悩んでいます。
ラボのメンバーからは1)PBSをいれてー20℃保存、2)乾燥させてー20℃保存とアドバイスをもらったのですが、よい方法をご存知の方はいらっしゃいませんか。よろしくお願い致します。
 
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ありがとうございました。 解決済み 削除/引用
No.6683-4 - 2018/02/14 (水) 21:42:05 - トロント
てーせる様

チャンバースライドです。情報が不足しており申し訳ありませんでした。
凍結せずに4℃保存で検討させていただきます。今後ともご指導よろしくお願い致します。

wせdfrgtひゅ 様
ご助言をいただきありがとうございました。凍結しないようにして観察してみます。私も数日は経験があるのですが、どの程度4℃保存で抗原性が維持されるのかわからず、長期保存に困っていました。今後ともご指導よろしくお願い致します。

(無題) 削除/引用
No.6683-3 - 2018/02/14 (水) 20:46:37 - wせdfrgtひゅ
凍結する必要はありません。というかいいことないのでしない方がいいです。
PFA固定後、TBSで数回洗った後、PBS or TBS中にいれて4C保存でいいです。(*免疫染色が前提ならばPFAに入れた状態での長期保存は不可。)仕事時間の関係で4~5日くらいならばそのようにして置いる人が周りも何人かいますが、特に問題なく染色できてます。ただ接着が弱い細胞だと多少剥がれる(or れやすくなる)かもしれません。

(無題) 削除/引用
No.6683-2 - 2018/02/14 (水) 20:15:20 - てーせる
チャンバースライドでしょうか?
蛍光顕微鏡が壊れて修理待ちの時には、
市販の保存料入りブロッキング試薬か
0.3%BSA/PBSに0.09%アジ化ナトリウムを添加したものを
多めに入れてパラフィルムで密封した後、
4℃遮光保存していました。
接着の弱い神経系の細胞でも1、2週間は余裕で保存できました。

凍結や乾燥は細胞の形態が損なわれたり、
バックグラウンドが高くなったりする可能性が高く、
悪手だと思います。

PFA固定後スライドの長期保存方法 削除/引用
No.6683-1 - 2018/02/14 (水) 07:48:43 - トロント
いつも勉強させていただいております。
今回スライド上で固定した細胞の保存方法についてお知恵をいただきたく質問させていただきます。
接着細胞をスライド上で培養し、4%PFAで10分固定後にPBS洗浄、その後に保存をしたいのですが、どのように保存するのが最も抗原性維持に適切かご教示いただけないでしょうか。
以前働いていたラボでは自分で染色をしていたので、固定後同日に染色を行っていたのですが、現在のラボのテクニシャンは他人が抗体を使うことを許可してくれず染色してくれるのを待たなければいけません。
数日で染色してくれるならばPBSにいれて4℃保存でも染まると読んだことがあるのですが、1、2週間取り掛かってくれないことも多く、長期保存方法に悩んでいます。
ラボのメンバーからは1)PBSをいれてー20℃保存、2)乾燥させてー20℃保存とアドバイスをもらったのですが、よい方法をご存知の方はいらっしゃいませんか。よろしくお願い致します。

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