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FBSによるリン酸化タンパクの誘導 トピック削除
No.7666-TOPIC - 2019/02/07 (木) 21:09:42 - このは
培地に5%FBSを加え、培養した細胞をウエスタンし、リン酸化タンパクを検出しました。
かなりはっきり検出され、増殖を促進するpdgf処理をした細胞と差がありませんでした。

FBS入り培地でかうだけでもかなり強く増殖シグナルの一つであるリン酸化タンパクは活性化されるのでしょうか。
 
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No.7666-7 - 2019/02/10 (日) 22:27:38 - このは
ありがとうございます。
エラーで解決にできないのですが、解決にさせていただきます。

(無題) 削除/引用
No.7666-6 - 2019/02/10 (日) 18:55:40 - C
血清の役割はいろいろあるとは思いますが、おもな役割は、増殖因子と接着因子の供給と脂質成分の供給です。血清中にはPDGFはそれなりの量あるから、これは十分想定される結果とおもいます。ロットや前処理の影響でPDGFの量や活性は変動するようにもおもいますので、血清入り培地を使用するならばそのあたりの条件は留意したほうがよいとおもいます。

(無題) 削除/引用
No.7666-5 - 2019/02/08 (金) 12:02:09 - このは
おおさんぺんぺんさん、ありがとうございます!

(無題) 削除/引用
No.7666-4 - 2019/02/08 (金) 02:38:12 - おお
もうちょっと詳しく言うと、たとえばMAPKなどは一度血清の増殖刺激をSerum starvationで遮断してから刺激しないと顕著な動きが観察できない。

リン酸化タンパクがanti phosphoserine antibodyなど任意のものを見ているならいろいろなシグナルの活性を見ていることになるし。

それともチロシンのほうを見てるのかな。

(無題) 削除/引用
No.7666-3 - 2019/02/08 (金) 02:31:57 - ぺんぺん
されます。

私なら、細胞を無血清で一晩放置し、その後、PDGFまたはコントロールを加えます。
ポジコンとして5%FBSで刺激ですね。

(無題) 削除/引用
No.7666-2 - 2019/02/08 (金) 02:18:57 - おお
5%FBSで増殖するしね。

FBSによるリン酸化タンパクの誘導 削除/引用
No.7666-1 - 2019/02/07 (木) 21:09:42 - このは
培地に5%FBSを加え、培養した細胞をウエスタンし、リン酸化タンパクを検出しました。
かなりはっきり検出され、増殖を促進するpdgf処理をした細胞と差がありませんでした。

FBS入り培地でかうだけでもかなり強く増殖シグナルの一つであるリン酸化タンパクは活性化されるのでしょうか。

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